[发明专利]一种湿地松胚性愈伤组织诱导与增殖的方法

说明书

本发明提供了一种湿地松胚性愈伤组织诱导与增殖的方法，包括以下步骤：(1)胚性愈伤组织的诱导培养：将未成熟的湿地松种胚置于胚性愈伤组织诱导培养基(以DCR培养基为基础培养基，并添加蔗糖30g/L、卡拉胶7g/L、2,4‑二氯苯氧乙酸(2,4‑D)1.0mg/L‑2.0mg/L、N6‑呋喃甲基腺嘌呤(KT)1.0mg/L‑2.5mg/L、L‑谷氨酰胺300mg/L、水解酪蛋白250mg/L‑500mg/L、肌醇1g/L、2‑(N‑吗啉)乙磺酸一水物250mg/L)上进行诱导培养，获得初代胚性愈伤组织。(2)胚性愈伤组织增殖：将步骤(1)获得的胚性愈伤组织转移到增殖培养基(以DCR培养基为基础培养基，并添加麦芽糖30g/L、卡拉胶7g/L、2,4‑D0.5mg/L‑1.0mg/L、6‑苄氨基腺嘌呤(6‑BA)0.5mg/L‑1.0mg/L、L‑谷氨酰胺300mg/L、水解酪蛋白250mg/L‑500mg/L)中进行增殖培养，获得增殖胚性愈伤组织。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，特别是涉及一种湿地松胚性愈伤组织诱导与增殖的方法。

背景技术

湿地松(Pinus elliottii Engelm)是原产于美国东南部低海拔温暖地区的一种高大乔木，由于其耐贫瘠、生长快、材性好以及松脂产量高等优良性征，现已经广泛种植于我国江西、福建、湖南等南方多个省份。由于湿地松较高的经济和生态价值，已成为我国人工林经营中主栽树种之一。多年来科研工作者围绕湿地松遗传改良研究一直在持续，但传统湿地松多世代杂交育种周期长，严重制约了湿地松的优良品种选育，如何缩短湿地松育种周期就变的十分迫切。

无性系林业是世界林业发展的一个趋势，通过选、引、育等方法选育出林木优良无性系，并将优良无性系经过无性繁殖进行扩繁，短时间内繁育大量性状统一的优良苗木用于人工林经营，可以缩短湿地松良种推广进程，提高生态和经济效益。目前湿地松无性繁殖技术的研究有扦插、嫁接、常规组织培养等方法，但成本高，效率低，难以达到生产要求。

体细胞胚发生技术是现阶段无性系林木种苗繁育效率最高的技术。湿地松体胚发生技术是在人工条件下通过诱导体细胞转向胚性细胞发育，再增殖获得大量胚性细胞系，经合适的条件诱导形成体细胞胚，进而萌发成植株，原则上一个胚性细胞发育成一株苗。在湿地松体胚发生技术中，胚性愈伤组织的诱导和胚性细胞增殖是体胚生产体系的第一步，也是关键一步。因此，有必要建立一种高效、稳定的胚性愈伤诱导组织和增殖方法。

发明内容

本发明目的是提供了一种湿地松胚性愈伤组织诱导与增殖的方法，具有较高的湿地松胚性愈伤组织的诱导率和增殖效果，良好的保留了愈伤组织的胚性，为湿地松体胚工厂化生产提供基础。

本发明通过如下技术方案实现上述目的：

一种湿地松胚性愈伤组织诱导与增殖的方法，包括以下步骤：

(1)外植体的选择：取生长势好、无虫害，天然授粉的湿地松球果，将球果在超净工作台中进行消毒，剥出种子，挑去种皮获得未成熟的种胚作为外植体；

(2)胚性愈伤组织的诱导培养：将步骤(1)获得的未成熟的种胚置于湿地松胚性愈伤组织诱导培养基上进行诱导培养，获得初代胚性愈伤组织，所述胚性愈伤组织诱导培养基是以DCR培养基为基础培养基，并添加蔗糖30g/L、卡拉胶7g/L、2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)1.0mg/L-2.5mg/L、KT(N6-呋喃甲基腺嘌呤)1.0mg/L-2.5mg/L、L-谷氨酰胺300mg/L、水解酪蛋白250mg/L-500mg/L、肌醇1g/L、2-(N-吗啉)乙磺酸一水物250mg/L；