[发明专利]一种用于检测头颈鳞癌致癌基因检测的探针序列及其试剂盒、应用

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种用于检测头颈鳞癌致癌基因检测的探针序列及其试剂盒、应用。本发明所述探针序列包括高危型HPV16、HPV18型中的一种或两种的探针序列；所述HPV16型和HPV18型HPV探针序列均由捕获延伸探针、K型标记延伸探针和封闭探针三类探针序列组成。本发明针对人乳头瘤病毒型E6E7区域进行延伸捕获探针、K型标记探针以及封闭探针的人为优化和设计，通过QuantiMAT技术实现了头颈鳞癌主要致病亚型HPV16、18 E6E7 mRNA的特异性检测，能够及早发现一些微观的分子水平基因突变导致的表观改变，并表现出良好的特异性、准确度和灵敏度。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种用于检测头颈鳞癌致癌基因检测的探针序列及其试剂盒、应用。

背景技术

头颈部恶性肿瘤是一种局部性的侵袭性疾病，90%以上为鳞状细胞癌。在世界范围内均是主要的公共健康问题，每年约有40多万新增病例。全球约有26%的头颈部鳞癌检测出HPV致癌基因组DNA。新近的研究表明感染有转录活性的HPV的头颈鳞癌，其基因表达谱完全不同于没有感染HPV的肿瘤。这一现象表明HPV感染在头颈鳞癌细胞肿瘤的形成过程中发挥了重要的作用。

HPV感染参与了头颈鳞癌细胞肿瘤的早期发展，表明HPV感染在其形成过程中发挥了重要的作用。已有研究发现，在头颈鳞癌组织中鉴定出的某些致癌性HPV类型与宫颈癌中的HPV类型相同，同时分子生物学实验结果显示他们还具有相同的病毒癌基因蛋白，即HPV高危型E6及E7。与宫颈癌相似，HPV16也是HPV阳性头颈癌中最常见的HPV分型。其主要的致病机制是HPV感染人类粘膜组织后，HPV DNA以游离或者整合形式进入宿主细胞内，病毒基因组中的早期区域E6及E7通过与p53、pRB、cyclinA、cyclinE及CDK2等相互作用，导致细胞加速增殖和转化。HPV感染代表了一类不同的头颈鳞癌致癌的分子通路。因而它已经逐渐被认为是继吸烟、饮酒之后的第三大头颈鳞癌的致病因素。因此，对头颈鳞癌主要致病亚型HPV16、18 E6E7 mRNA实现特异性检测，能够及早发现一些微观的分子水平基因突变导致的表观改变具有重要意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种用于检测头颈鳞癌致癌基因检测的探针序列及其试剂盒、应用。本发明提供的探针序列对于检测头颈鳞癌主要致病亚型HPV16、18 E6E7 mRNA有较高的特异性和灵敏度。

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：

一种用于检测头颈鳞癌致癌基因检测的探针序列，包括HPV16和/或HPV18型探针序列；所述HPV16、HPV18型探针序列均由捕获延长探针（Capture extender，CE）、标记延长探针（Label extender，LE）和封闭探针（Blocking，BL）组成；

所述HPV16型捕获延长探针序列如SEQ ID No.1~6所示，所述HPV16型标记延长探针序列如SEQID No.7~30；所述HPV16型封闭探针序列如SEQ ID No.31-36所示；

所述HPV18型捕获延长探针序列如SEQ ID No.37~44所示，所述HPV16型标记延长探针序列如SEQID No.45~70；所述HPV16型封闭探针序列如SEQ ID No.71-73所示。

在一个具体实施例中，考察了本发明探针序列的灵敏度和准确度结果显示，本发明探针序列对样本检测的准确率达100%，对照组探针序列的准确率仅为43%。灵敏度也明显优于对照探针序列，表明本发明所述探针序列对头颈鳞癌主要致病亚型HPV16、18 E6E7mRNA的检测有更高的准确度和灵敏度。因此，本发明还提供了所述探针序列在制备检测头颈鳞癌致癌基因的试剂盒中的应用。

本发明还提供了一种用于检测头颈鳞癌致癌基因的试剂盒包括本发明所述探针序列。