[发明专利]抗邻苯二甲酸二乙酯单克隆抗体杂交瘤细胞株及其构建方法

权利要求书

1.一种分泌抗邻苯二甲酸二乙酯单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.17402。

2.一种根据权利要求1所述的抗邻苯二甲酸二乙酯单克隆抗体的杂交瘤细胞株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、以邻苯二甲酸单乙酯为半抗原偶联物，利用混合酸酐法偶联制备邻苯二甲酸单乙酯-BSA免疫抗原，利用碳二亚胺法制备邻苯二甲酸单乙酯-OVA包被抗原；

S2、采用所述邻苯二甲酸单乙酯-BSA免疫抗原对小鼠进行皮下免疫，收集血清样品；采用所述邻苯二甲酸单乙酯-OVA作为ELISA检测的包被抗原，对获得的血清样品进行ELISA免疫血清效价检测，筛选出血清效价较高的免疫小鼠；

S3、利用聚乙二醇诱导细胞融合法，以PEG1450为媒介，将小鼠SP2/0细胞和步骤S2得到的免疫小鼠的脾细胞进行融合，融合后进行ELISA检测，筛选阳性杂交瘤细胞；

S4、对所述阳性杂交瘤细胞进行亚克隆，并对细胞培养上清液进行ELISA检测；取阳性亚克隆杂交瘤细胞进行建株保存，得到所述抗邻苯二甲酸二乙酯单克隆抗体杂交瘤细胞株。

3.根据权利要求2所述的抗邻苯二甲酸二乙酯单克隆抗体杂交瘤细胞株的构建方法，其特征在于，步骤S1中，利用混合酸酐法偶联制备邻苯二甲酸单乙酯-BSA免疫抗原的步骤包括：将邻苯二甲酸单乙酯用DMSO溶解成30mg/mL的储存液，取体积比为(0.5*10³-2*10³)：(50-130)：(5-20)的MEP、乙胺和苯甲酸异丁酯，搅拌反应1-4h，得到A液；取BSA加PBS缓冲液溶解，控制浓度为1.5-30mg/mL，得到B液；再将A液缓慢滴加到B液中，在室温下搅拌反应5-8h；最后置于0.01-0.05mol/L PBS缓冲液透析纯化48-96h，换液多次，-20℃保存，得到所述邻苯二甲酸单乙酯-BSA免疫原。

4.根据权利要求2所述的抗邻苯二甲酸二乙酯单克隆抗体杂交瘤细胞株的构建方法，其特征在于，步骤S1中，利用碳二亚胺法偶联制备邻苯二甲酸单乙酯-OVA包被抗原的步骤包括：取邻苯二甲酸单乙酯用DMF溶解为10mg/mL，取用量比为(0.5-2)mL：(4-6)mg：(9-15)mg的MEP、N-羟基琥珀酰亚胺和EDC，在室温下搅拌反应1-3h，得到A液；取OVA加PBS缓冲液溶解，控制浓度为5-20mg/mL，得到B液；再将A液缓慢滴加到B液中，在室温下搅拌反应5-18h；最后置于0.01-0.05mol/L PBS缓冲液透析纯化48-96h，换液多次，-20℃保存，得到所述邻苯二甲酸单乙酯-OVA包被抗原。

5.根据权利要求2所述的抗邻苯二甲酸二乙酯单克隆抗体杂交瘤细胞株的构建方法，其特征在于，步骤S2中，所述免疫包括先进行三次间隔免疫，再进行一次加强免疫。

6.一种抗邻苯二甲酸二乙酯单克隆抗体，其特征在于，所述抗体由权利要求1所述的杂交瘤细胞株分泌而得。

7.一种根据权利要求6所述的抗邻苯二甲酸二乙酯单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将小鼠腹腔接种所述杂交瘤细胞，采集腹水，离心收集上清液；将所述上清液进行纯化，即得。

8.根据权利要求7所述的抗邻苯二甲酸二乙酯单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述纯化的步骤包括：将所述上清液用辛酸-硫酸铵法粗纯化和亲和层析法进一步纯化。

9.一种根据权利要求2所述的抗邻苯二甲酸二乙酯单克隆抗体在制备水环境中邻苯二甲酸二乙酯的免疫检测试剂盒中的应用。

10.一种水环境中邻苯二甲酸二乙酯的免疫检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求2所述的抗邻苯二甲酸二乙酯单克隆抗体。

11.一种水环境中邻苯二甲酸二乙酯的胶体金酶联免疫层析试纸条，其特征在于，所述试纸条包含权利要求2所述的抗邻苯二甲酸二乙酯单克隆抗体。