[发明专利]一种携载抗肿瘤药物的血小板载药体系的制备方法

权利要求书

1.一种携载抗肿瘤药物的血小板载药体系的制备方法，其特征在于：该制备方法包括以下步骤：

(1)血小板与抗肿瘤药物的混合物：将血小板与抗肿瘤药物在37℃的避光环境中震荡反应1-2小时，得到血小板与抗肿瘤药物的混合物；

(2)将外壳载体血小板膜通过共挤出的方法包载所述混合物，得到仿生载药粒；

(3)将靶向材料修饰在所述仿生载药粒表面，得到携载抗肿瘤药物的血小板载药体系。

2.根据权利要求1所述的一种携载抗肿瘤药物的血小板载药体系的制备方法，其特征在于：所述血小板的制备：常温下，在全血中加入柠檬酸钠溶液，离心后得到血小板血浆，将所述血小板血浆在深度离心，并用PBS缓冲液洗涤至血小板计数控制在(2.5-3.0)×10⁵/uL，其中全血与重量百分含量为2-4％柠檬酸钠溶液的体积比为7:1-10:1，离心为以1200rpm离心10-15min，深度离心为以3600rpm离心8-12min。

3.根据权利要求1所述的一种携载抗肿瘤药物的血小板载药体系的制备方法，其特征在于：所述抗肿瘤药物为蒽环类抗肿瘤药物、生物碱类抗肿瘤药物或烷化剂类抗肿瘤药物的一种，抗肿瘤药物的浓度为0.05-0.15mmol/L，抗肿瘤药物与血小板的体积比为3:1。

4.根据权利要求1所述的一种携载抗肿瘤药物的血小板载药体系的制备方法，其特征在于：所述血小板膜的制备：将血小板置于抗凝的离心管中静置30min，100g离心20min吸取上清液，滴加含有1mM EDTA和2mM前列腺素E1的PBS缓冲液，然后800g离心20min丢弃上清液，并且将血小板重新悬浮于低渗PBS溶液中，将其放入-80℃的冰箱中冷冻6-12h，之后在25℃下解冻1-6h，重复3次，冻融液3000r/min离心30min，分别收集血小板碎片及上清，将血小板碎片悬于PBS溶液中洗涤离心，用50/60Hz的探针式超声仪超声破碎5min，3000r/min离心，收集上清。

5.根据权利要求4所述的一种携载抗肿瘤药物的血小板载药体系的制备方法，其特征在于：将所述混合物与所述提取好的血小板膜按照1：3的体积比混合在一起，通过挤出仪反复挤压4-6次实现血小板膜与所述混合物的融合，然后以3000r/min的速度离心去除多余的血小板膜，得到仿生载药粒。

6.根据权利要求5所述的一种携载抗肿瘤药物的血小板载药体系的制备方法，其特征在于：所述挤出仪为含有孔径为400nm的聚酯碳酸酯膜的挤出仪。

7.根据权利要求1所述的一种携载抗肿瘤药物的血小板载药体系的制备方法，其特征在于：所述靶向材料为将抗CD22单抗与Traut’s试剂在37±1℃的避光环境中震荡反应1-2小时，然后超滤离心，得到富含巯基的抗CD22单抗。

8.根据权利要求7所述的一种携载抗肿瘤药物的血小板载药体系的制备方法，其特征在于：将所述富含巯基的抗CD22单抗与所述仿生载药粒混合，在37±1℃的避光环境中震荡反应5～6小时，通过琼脂糖凝胶2B分离柱分离，并离心洗涤，得到携载抗肿瘤药物的血小板载药体系。

9.根据权利要求8所述的一种携载抗肿瘤药物的血小板载药体系的制备方法，其特征在于：所述离心洗涤是用PBS缓冲液以12000rpm离心洗涤2-3次，每次2-4分钟。