[发明专利]可同步检测3个酒精代谢基因4个SNP位点的多重PCR检测方法

权利要求书

1.一种可同步检测3个酒精代谢基因4个SNP位点的多重PCR检测方法，其特征在于，所述4个SNP位点具体为ADH2基因的突变位点rs1229984，ALDH2基因的突变位点rs671，GABRA2基因的突变位点rs279858及rs279826；包括以下步骤：

(1)根据4个SNP位点的上下游序列分别设计上游引物、下游引物；

(2)配置多重PCR反应体系；

(3)PCR扩增。

2.根据权利要求1所述的可同步检测3个酒精代谢基因4个SNP位点的多重PCR检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中的引物包括：

上游引物序列ADH2-F：GCCTGAGTGTGAATCCTGTACCTGGTTTG；

下游引物序列ADH2-R：CGGGAAGGTAGAGAAGGGCTTTAGACTGAATA；

上游引物序列ALDH2-F：GGACAGAGCAGAGGCTGGGTCTTTAC；

下游引物序列ALDH2-R：TCAGGTCCTGGGAGTGTAACCCATAACC；

上游引物序列GABRA2-826F：CGAGCTGCAGTGTTTGGATTAGCCCTATG；

下游引物序列GABRA2-826R：GGTCCAAGGCAATCACTTTGCTCAATACC；

上游引物序列GABRA2-858F：CCATGGTATACAGCAGAGTCCCATCATC；

下游引物序列GABRA2-858R：GCCAGGTCCTATGAATATCCTTCGACTAAA；

如序列表中SEQ ID NO:1-8所示。

3.根据权利要求2所述的可同步检测3个酒精代谢基因4个SNP位点的多重PCR检测方法，其特征在于，步骤(2)中多重PCR体系条件为：缓冲液为2×，4种dNTP的终浓度为400-500μM，DNA聚合酶的用量为1-5U，4对引物种每条引物的浓度为60-100nM。

4.根据权利要求3所述的可同步检测3个酒精代谢基因4个SNP位点的多重PCR检测方法，其特征在于：步骤(3)中多重PCR扩增的条件为94℃30s-5min；98℃5-30s，50-66℃40s，68℃5-180s，20-40个循环；68℃0-20min。

5.根据权利要求1-4任一所述的可同步检测3个酒精代谢基因4个SNP位点的多重PCR检测方法，其特征在于：所检测的材料为人类基因组DNA，选用手工提取或试剂盒提取方法对来源的样本进行提取处理得到的DNA；所述的来源样本包括含有人类基因组DNA的人类的血液、组织、口腔拭子样本。

6.根据权利要求5所述的可同步检测3个酒精代谢基因4个SNP位点的多重PCR检测方法，其特征在于：待测DNA样本的制备方法包括如下步骤：用口腔拭子收集的口腔脱落细胞或收集的新鲜外周血样本采用天根口腔拭子基因组DNA提取试剂盒或血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA，并采用NP80-touch测定DNA的浓度及纯度，然后保存基因组DNA。

7.根据权利要求1-4任一所述的可同步检测3个酒精代谢基因4个SNP位点的多重PCR检测方法，其特征在于：进行多重PCR扩增反应时，四个基因同时在一个扩增体系中进行，同时扩增ADH2：rs1229984；ALDH2：rs671；GABRA2：rs279858和rs279826共计4个酒精代谢基因SNP位点。