[发明专利]一种基于固相凝集技术的分检式红细胞血型不规则抗体检测试剂盒及制备方法

说明书

本发明涉及一种基于固相凝集技术的分检式红细胞血型不规则抗体检测试剂盒及制备方法，属试剂盒制备技术领域，该试剂盒包括：（1）分检式固相凝集反应微板；（2）低离子强度溶液；（3）指示系统；（4）阴性对照血清；（5）阳性对照血清；制备方法包括：（1）分检式固相凝集反应微板的制备；（2）低离子强度溶液的制备；（3）指示系统的制备；（4）阴性对照血清的制备；（5）阳性对照血清制备；通过创新性的利用单克隆抗体对红细胞的高特异性吸附、利用冷冻干燥保存技术、利用高灵敏度的二步法指示系统，切实解决目前临床不规则抗体检测方法中灵敏度低、红细胞难以保存、易漏检等难题，为临床一线检测工作提供一种高性价比的检测试剂盒。

技术领域

本发明涉及一种以固相凝集技术为基础的分检式红细胞血型不规则抗体检测试剂盒及制备方法，属于试剂盒制备技术领域。

背景技术

红细胞血型系统不规则抗体是指在人体内除了抗-A和抗-B以外的血型抗体。人红细胞除了ABO抗原外，常见的抗原还有D、C、E、c、e、JK^a、JK^b、M、N、S、s、Fy^a、Fy^b、Lu^b等。相应的，针对这些抗原所产生的抗体属于不规则抗体范畴。

不规则抗体多数属于免疫性抗体，其产生途径主要有：输血、妊娠、接触天然免疫性抗原物质等。这些抗体以IgG型为主。对于受血者而言，体内存在不规则抗体时，一旦输入对应抗原阳性的红细胞，轻则引起溶血性输血反应，重则危及患者的生命安全；对于献血者而言，如果其体内含有不规则抗体，该抗体一旦被输入含有相应抗原的受血者，同样容易引起输血反应甚至危及生命；对于孕产妇而言，IgG型的不规则抗体透过胎盘进入胎儿体内，则可引发胎儿/新生儿溶血病。因此，国家卫计委在《临床输血技术规范》中，明确规定输血前检查必须包括不规则抗体筛检试验，以降低受血者发生输血反应的风险；在临床产科实践中，也在不断的强化对多次妊娠的孕妇，将不规则抗体的筛查作为孕期保健的常规检测，以降低胎儿/新生儿发生溶血病的风险。

目前国内各级医疗机构和采供血机构检测不规则抗体的方法主要是试管法和抗人球蛋白微柱凝胶卡法。试管法主要基于IgM型抗体与相应抗原在盐水介质中的反应进行试验，但不能检出IgG型的不规则抗体。且试管法需要手动振摇观察，容易受操作者个人经验的影响，导致结果判读差异较大。因此，近年来，抗人球蛋白微柱凝胶卡法得到了广泛的应用。其原理主要是利用凝胶介质的分子筛作用，将凝胶颗粒悬浮在缓冲液中，灌入微柱卡中制得。实验时，在反应腔中分别加入抗筛细胞和待检血清，孵育一定时间后，再离心观察结果。如果受检标本含有不规则抗体，则形成的凝集块不能通过凝胶柱的分子筛而滞留在凝胶柱的上层或分散于柱中；若受检血清中无不规则抗体，离心后游离的试剂红细胞可以通过分子筛而沉积在微柱的底部。该方法受试剂红细胞浓度、离心力和离心时间、凝胶粒径大小、悬浮介质中抗凝剂浓度等因素影响，检测的灵敏度容易受到影响，如Kidd血型系统抗体和中国人群的高频不规则抗体抗-Mur等具有剂量效应的抗体，用微柱凝胶卡法检验时，容易漏检造成输血反应[Brian Kay,Jessica L.Poisson,Chirstopher W.Tuma,等.Anti-JK^a that are detected by solid-phase red blood cell adherence but missed bygel testing can cause hemolytic transfusion reactions.Transfusion,2016,56:2973-2979.]。另一方面，微柱凝胶卡价格相对较高，需要配套的孵育和离心设备，限制了其在多数医疗机构的应用。