[发明专利]一种基于固相凝集技术的新生儿溶血病实验检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及一种基于固相凝集技术的新生儿溶血病实验检测试剂盒及其制备方法，属于试剂盒制备技术领域，试剂盒包括：（1）固相凝集反应微板；（2）低离子强度溶液；（3）指示系统；（4）阴性对照血清；（5）阳性对照血清；制备方法包括：（1）固相凝集反应微板的制备；（2）低离子强度溶液的制备；（3）指示系统的制备；（4）阴性对照血清制备；（5）阳性对照血清制备；通过创新性的利用单克隆抗体对红细胞的高特异性吸附、利用冷冻干燥保存技术、利用高灵敏度的二步法指示系统，切实解决目前新生儿溶血病检测方法中灵敏度低、红细胞难保存、易漏检抗体等难题，为临床一线检测工作提供一种高性价比的新生儿溶血病实验检测试剂盒。

技术领域

本发明涉及一种基于固相凝集技术的新生儿溶血病实验检测试剂盒及其制备方法，属试剂盒制备技术领域。

背景技术

新生儿溶血病(hemolytic disease of newborn,HDN)是指由于母胎或母婴血型不合引起的同族免疫性溶血。该病发生的机理主要在于：胎儿的血型抗原一半由父亲遗传,另一半由母亲遗传。当胎儿所遗传的父源性血型抗原恰为母体所缺乏时，一旦该父源性红细胞血型抗原在妊娠的中晚期通过胎盘进入母体时,则可以刺激母体产生相应的免疫性血型抗体。这种IgG 性质的免疫性抗体又通过胎盘进入胎儿血液循环后，与含有相应抗原的胎儿红细胞相结合，导致后者被致敏。这种致敏的红细胞在胎儿肝、脾的单核-吞噬细胞系统内被破坏，从而引起胎儿或新生儿溶血病的发生，进一步导致死胎、流产或早产。胎儿出生后(即新生儿)容易出现贫血、高胆红素血症，严重者可导致核黄疸甚至危及生命安全。因此，准确的新生儿溶血病实验检测能够为临床提供足够的证据支持，并为临床及时采取对症治疗措施具有重要的参考价值。

在现今的36个人类红细胞血型系统中，中国人群以ABO血型不合的溶血病最为常见，约占新生儿溶血病的85.3％；其次为RhD和RhE溶血病，两者约占14.6％[薛辛东,杜立中主编, 儿科学,人民卫生出版社,2005年,第一版,139.]，其他的诸如抗-Di^a等也有报道[邵华，马署轩.抗-Di^a引起的新生儿溶血病1例报告，北京医学，2018，40(2)：170.颜永强，斯景萍，崔毅军.抗-Di^a引起新生儿溶血病1例，临床检验与输血，2007，9(1)：78—79.]。因此，无论采用何种实验检测方法，应当针对中国新生儿人群溶血性抗体的实际分布情况进行设计和检测。

胎儿或新生儿溶血病的检测实验包括:直接抗人球蛋白实验、游离抗体检测实验、抗体释放检测实验。直接抗人球蛋白实验是利用抗人球蛋白检测患儿红细胞是否被IgG抗体致敏的一项实验。游离抗体检测实验是用特定的试剂红细胞与患儿血浆混合后孵育、洗涤，最后用抗人球蛋白进行检测。如果试剂红细胞出现凝集，则为阳性反应，表明患儿血浆中有游离的溶血性抗体；如果试剂红细胞未出现凝集，则为阴性反应，表明患儿血浆中未检出游离的溶血性抗体。抗体释放检测实验是通过热放散或酸放散将患儿红细胞上结合的抗体释放于放散液中，再用特定的试剂红细胞与放散液混合后孵育、洗涤，最后用抗人球蛋白进行检测。如果试剂红细胞出现凝集，则为阳性反应，表明放散液中有从患儿红细胞上释放的溶血性抗体；如果试剂红细胞未出现凝集，则为阴性反应，表明放散液中未检出溶血性抗体，该项实验是新生儿溶血病的确诊性实验。

目前国内各级医疗机构主要采用保存制备的ABO红细胞试剂配以抗人球蛋白微柱凝胶卡法进行新生儿溶血病的实验检测。其原理主要是利用凝胶介质的分子筛作用，将凝胶颗粒悬浮在缓冲液中，灌入微柱卡中制得。实验时，在反应腔中分别加入ABO细胞和待检血清或放散液，孵育一定时间后，再离心观察结果。如果受检标本含有溶血性抗体，则相应的试剂红细胞就会与之发生反应而不能通过凝胶柱的分子筛，最终滞留在凝胶柱的上层或分散于柱中；若受检血清或放散液中不含有溶血性抗体，则游离的试剂红细胞离心后可以通过分子筛而沉积在微柱的底部。该方法受试剂红细胞浓度、离心力和离心时间、凝胶粒径大小、悬浮介质中抗凝剂浓度等因素影响，造成检测的灵敏度容易受到干扰。另一方面，微柱凝胶卡价格相对较高，需要专用配套的孵育和离心设备，限制了其在多数医疗机构的应用。