[发明专利]一种从猪肠道分离贝氏酵母菌的方法及其发酵方法

说明书

本发明涉及一种从猪肠道分离贝氏酵母菌的方法及其发酵方法，属于微生物领域。本发明的一种从猪肠道分离贝氏酵母菌的方法，包括步骤：将猪肠道内容物置于灭菌瓶内，加生理盐水稀释，混匀得到菌液；将菌液接种于酵母菌培养基中，使菌液在所述酵母菌培养基的表面均匀扩散，在30‑34℃下培养20‑28h，得到贝氏酵母菌的菌体。本发明的从猪肠道分离贝氏酵母菌的方法，可从动物消化道内分离出既能助消化促生长又能预防动物腹泻的酵母菌，其易于培养，耐受性强，在动物体同源菌种好定植，发酵成本低，适合液体培养和固体高密度培养。

技术领域

本发明涉及一种从猪肠道分离贝氏酵母菌的方法及其发酵方法，属于微生物领域。

背景技术

随着人们对抗生素的认识的深入，抗生素得到了大规模的生产和广泛的应用，同时抗生素所带来的负面影响得到人们越来越多的关注，科学家们发现滥用抗生素能引起机体的正常菌群失调、机体产生耐药性，畜产品中的化学药品、抗菌素、激素含量的超标，不仅会导致动物抗病力减弱，药物残留还通过畜产品威胁人类健康。而且耐药性可通过耐药因子(R因子)经细菌传递给人类，使保健和治疗更趋困难、这将对人类的生存和发展产生严重负面的影响。于是，出现了很多代替抗生素的新药物，其中益生菌效果较好。益生菌是一种能够直接饲喂的微生物饲料添加剂，即将某些对动物机体健康有益的微生物饲料喂给动物，在消化道内通过竞争性排斥作用，抑制病原菌，维持肠道微生物区系的平衡。益生素以其安全高效、环保等功能正发挥着巨大的潜能，益生菌无毒副作用、无耐药性；能替代抗生素、调整肠道菌群平衡预防二重感染、提高机体免疫力、提高综合抗病力、降低发病率，并能分泌多种酶、提高消化率、促生长剂、降低养殖成本、提高动物产品品质、丰富食品风味、安全提高瘦肉率、它能提高有害物质(胺、氨)的排出，减少臭味、去蝇咀。随着人民生活水平和消费水平的提高以及农产品国际市场竞争力的提升，益生菌必将具有十分广阔的发展的空间。双岐杆菌和乳酸菌具有很好的作用，但耐高温和耐酸碱等耐受力差，活性易下降。

因此，针对上述问题，目前亟待提出一种方法，能够分离出耐受力强、活性好的益生菌。

发明内容

本发明的目的是提供一种从猪肠道分离贝氏酵母菌的方法及其发酵方法，以取代现有技术中的抗生素。

本发明的从猪肠道分离贝氏酵母菌的方法，包括如下步骤：将猪肠道内容物置于灭菌瓶内，加生理盐水稀释，混匀得到菌液；将菌液接种于酵母菌培养基中，使菌液在所述酵母菌培养基的表面均匀扩散，在30-34℃下培养20-28h，得到贝氏酵母菌的菌体。

进一步地，所述酵母菌培养基中包括：蛋白胨、麦芽糖、酒石酸、牛肉粉、氯化钠与琼脂。

进一步地，所述酵母菌培养基按照质量百分比计包括：蛋白胨1％、麦芽糖4％、浓度为10％的酒石酸溶液1.4％、牛肉粉0.35％、氯化钠0.5％、琼脂2％，余量为水。

进一步地，所述酵母菌培养基的pH为5.8-6.0。

本发明的从猪肠道分离的贝氏酵母菌的发酵方法，包括步骤：包括如下步骤：

(1)将所述的贝氏酵母菌的菌体接种于酵母菌发酵培养基中，培养基pH为6.0-6.5，于28-32℃、150-200rpm的条件下培养24-36h，得到一级种子发酵液；

(2)将步骤(1)中得到的一级种子发酵液接种于酵母菌发酵培养基中，于30-34℃、180-220rpm的条件下培养10-15h，得到二级种子发酵液；

(3)将步骤(2)中得到的二级种子发酵液接种于酵母菌发酵培养基中，于30-34℃、180-220rpm的条件下培养4-8h，即可。

进一步地，步骤(1)中，所述一级种子发酵液的菌体为6h-12h对数生长期的贝氏酵母菌；步骤(2)中，所述二级种子发酵液的菌体为对数生长期的贝氏酵母菌。