[发明专利]一种具有调控血管细胞生长作用的功能丝素材料及其制备方法

权利要求书

1.一种具有调控血管细胞生长作用的功能丝素材料的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)制备脱胶后的家蚕丝素纤维：将家蚕蚕丝或茧壳放入碳酸钠水溶液、碳酸氢钠水溶液或生物酶水溶液中加温处理，清洗，拉松，干燥，得到脱胶后的家蚕丝素纤维；

(2)制备家蚕丝素溶解液：将所述脱胶后的家蚕丝素纤维完全溶解于溴化锂水溶液中，获得丝素溶解液；

(3)制备纯化后的家蚕丝素蛋白水溶液：将所述丝素溶解液灌注于透析袋内，然后置于盛有去离子水的容器内，每隔2小时用新的去离子水或者纯水更换容器内的液体，持续透析3天后浓缩，得到纯化后的家蚕丝素蛋白水溶液，其中，所述透析袋为半透膜，截留分子量为10～16kDa，所述浓缩具体为采用旋转蒸发器浓缩，使调整透析后的家蚕丝素蛋白水溶液的质量分数为5～12％；

(4)制备具有调控血管细胞生长作用的功能丝素材料：

方法一：向所述纯化后的家蚕丝素蛋白水溶液中添加终浓度为50～1000nM的CGRP，然后添加与所述纯化后的家蚕丝素蛋白水溶液中丝素蛋白质量比为1:0.5～1:1.5的胶黏剂聚乙二醇双环氧丙烷醚，搅拌均匀，倒入一平整的聚苯乙烯平皿中，于-80℃～-20℃冷冻2～24小时，取出材料于冷冻干燥机中冻干，然后置于盛有去离子水的容器内浸泡24小时，每隔2小时更换一次容器内的去离子水，取出后再次冻干，得到具有调控血管细胞生长作用的功能丝素材料；

方法二：向所述纯化后的家蚕丝素蛋白水溶液中添加终浓度为50～1000nM的CGRP，然后分别加入是所述纯化后的家蚕丝素蛋白水溶液中丝素蛋白质量百分数30～50％的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和15～25％的N-羟基琥珀酰亚胺，再加入终浓度为0.05M的2-吗啉乙磺酸，冰浴搅拌10～30分钟后，倒入一平整的聚苯乙烯平皿中于-80℃～-20℃冷冻2～24小时，取出材料于冷冻干燥机中冻干，然后置于盛有去离子水的容器内浸泡24小时，每隔2小时更换一次容器内的去离子水，取出后再次冻干，得到具有调控血管细胞生长作用的功能丝素材料；

方法三：将所述纯化后的家蚕丝素蛋白水溶液在-80℃～-20℃温度下预冷冻2～24小时后，用冷冻干燥机冷冻干燥，然后取出置于盛有80％乙醇的容器中浸渍2小时，再用去离子水浸泡1～2天，每隔2小时更换一次容器内的去离子水，取出后再次冻干，获得冷冻的丝素材料，配制含终浓度10～1000nM的CGRP的胶黏剂溶液，将所述冷冻的丝素材料浸入所述胶黏剂溶液中，然后置于4℃下反应8～15小时，取出，用去离子水漂洗冻干，得到具有调控血管细胞生长作用的功能丝素材料，其中，所述胶黏剂溶液中含有摩尔比是CGRP的1～1.5倍的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺、含有终浓度为0.05M的2-吗啉乙磺酸。

2.根据权利要求1所述的具有调控血管细胞生长作用的功能丝素材料的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述将家蚕蚕丝或茧壳放入碳酸钠水溶液、碳酸氢钠水溶液或生物酶水溶液中加温处理是指将家蚕蚕丝或茧壳按1g:50mL的浴比放入质量浓度为0.2～0.8％的碳酸钠水溶液或0.5～1.0％碳酸氢钠的水溶液中在95～100℃的温度条件下处理2～3次，或1.0～2.5g/L的生物酶水溶液中在30～60℃的温度条件下处理2～3次，每次处理30分钟；所述干燥是指在60℃烘箱内干燥。

3.根据权利要求1所述的具有调控血管细胞生长作用的功能丝素材料的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述将所述脱胶后的家蚕丝素纤维完全溶解于溴化锂水溶液中是指称取所述脱胶后的家蚕丝素纤维，按1g:10mL的浴比溶解于9.3M的溴化锂水溶液中，在温度为65℃的条件下处理直至丝素纤维完全溶解。