[发明专利]HPLC法测定鲑鱼降钙素喷鼻剂中苯扎氯铵含量的方法

说明书

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种HPLC法测定鲑鱼降钙素喷鼻剂中苯扎氯铵含量的方法。所述方法采用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用优化的流动相A和流动相B进行等度洗脱；所述药物为多肽类喷鼻剂，抑菌剂为苯扎氯铵。本发明的方法能方便准确的测定多肽类药物鲑鱼降钙素喷鼻剂中抑菌剂的含量；本发明的方法操作简便、快速、准确、灵敏度高、重复性好、条件温和、拖尾因子小，通过系统的方法学验证，证明本方法适用于鲑鱼降钙素喷鼻剂中苯扎氯铵含量的测定，检查结果准确可靠，对于实现鲑鱼降钙素喷鼻剂的质量控制具有重要的意义。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种HPLC法分析测定鲑鱼降钙素喷鼻剂苯扎氯铵含量的方法。

背景技术

鲑鱼降钙素喷鼻剂用于治疗骨质疏松症、Paget’s症(变形性骨炎)、高钙血症、高血钙危象及各种骨痛等疾病，十多年来取得了较好的效果，因其疗效显著、副作用小受到医务工作者及患者的好评。

鲑鱼降钙素喷鼻剂是水溶液型制剂，苯扎氯铵是其抑菌剂，能够抑制细菌生长，从而延长药品的储存期限，同时保障患者在使用期间的安全。本品处方中所含的苯扎氯铵为常用抑菌剂，其用量过大会对鼻粘膜的纤毛摆动产生一定的抑制作用，用量不足则达不到相应的抑菌效力，因此，为进一步控制本品的质量，建立准确便捷的抑菌剂苯扎氯铵含量测定方法具有极其重要的意义。

苯扎氯铵作为季铵盐类化合物，色谱出峰极易拖尾，峰形较差，对准确定量造成一定的难度。现行2015年版中国药典硫酸新霉素滴眼液和妥布霉素滴眼液质量标准中涉及防腐剂苯扎氯铵的检测，但拖尾因子均较大(约1.5)。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种HPLC法分析测定鲑鱼降钙素喷鼻剂中苯扎氯铵含量的方法，能够准确测定鲑鱼降钙素喷鼻剂中苯扎氯铵含量，且该法操作简便、快速、准确、灵敏度高、重复性好、条件温和、拖尾因子小，检查结果准确可靠，对于实现鲑鱼降钙素喷鼻剂的质量控制具有重要的意义。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

HPLC法测定鲑鱼降钙素喷鼻剂中苯扎氯铵含量的方法，色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，YMC，型号：TA12S05-2546WT。

本发明研究发现，采用上述型号的色谱柱能够较好地实现鲑鱼降钙素喷鼻剂中苯扎氯铵与其他成分的分离，峰形好，拖尾因子小。该型号的色谱柱采用了有机硅烷和无机硅烷多层杂化基质颗粒，这种硅胶颗粒采用的封端技术能使容易反应的部位和难以侵蚀的非活性化剂相结合，并且能够最大程度地封锁住难以反应的硅醇基，从而实现了卓越性和耐久性并且获得良好的色谱峰形。

进一步地，上述方法采用的流动相A为9～11mmol/L醋酸铵水溶液，加1.5％的三乙胺，用冰醋酸调pH至5.0±0.5；流动相B为乙腈，以A:B＝28～32:72～68(体积比，v/v)等度洗脱。

最佳地，流动相A为10mmol/L醋酸铵水溶液，加1.5％的三乙胺，用冰醋酸调pH至5.0±0.5；流动相B为乙腈；A:B＝30:70(体积比，v/v)，等度洗脱。

本发明研究发现，采用现有方法流动相例如(流动相A为5mmol/L醋酸铵水溶液(加1％的三乙胺(TEA)，用冰醋酸调pH至5.0±0.5)，流动相B为乙腈；A:B＝35:65，等度洗脱)色谱出峰极易拖尾，峰形较差，对准确定量造成一定的难度。进一步地研究发现，采用本发明流动相能够改善苯扎氯铵的峰形，减少拖尾效应，从而有效地将苯扎氯铵与主成分和相关杂质进行分离，达到更加准确定量的目的。原理分析如下：C18键合相上残留的偏酸性硅醇基容易与碱性化合物结合而造成峰脱尾，所以，在流动相中加入碱性的三乙胺后可以首先与硅醇基结合，从而阻碍了样品中碱性化合物与硅醇基的作用，减少了峰拖尾。醋酸铵属于离子对试剂，离子对的浓度一般在10-50mmol/L之间，不同的浓度对于色谱的保留行为有不一样的影响，通过筛选离子浓度，可以得到优化的扫尾效果。