[发明专利]一种检测牛结核病IFN-γ和牛副结核病抗体的试纸条及其制备方法在审
| 申请号： | 201910308259.5 | 申请日： | 2019-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN109975538A | 公开（公告）日： | 2019-07-05 |
| 发明（设计）人： | 曹立辉;李雪平;窦文茂;古杰;孙贝贝;蔡晓丽;欧贤斌 | 申请（专利权）人： | 广州悦洋生物技术有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/533 | 分类号： | G01N33/533;G01N33/569 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 颜希文;宋静娜 |
| 地址： | 510320 广东省广州市广州国*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 荧光微球标记 包被 检测线 副结核病 牛结核病 试纸条 种检测 抗体 辣根过氧化物酶标记 单克隆抗体 多克隆抗体 生产成本低 兔抗牛IgG 定量检测 直接读数 质控线C 副结核 兔抗牛 吸水纸 样品垫 质控线 全血 鼠抗 稀释 制备 蛋白 检测 疾病 | ||
1.一种检测牛结核病IFN-γ和牛副结核病抗体的试纸条，其特征在于，包括样品垫、荧光微球标记垫、NC膜、吸水纸和PVC板；其中荧光微球标记垫上包被荧光微球标记的鼠抗牛IFN-γ单克隆抗体和荧光微球标记的牛副结核蛋白；NC膜上设有检测线T1、T2和质控线C，检测线T1包被兔抗牛IFN-γ多克隆抗体，检测线T2包被辣根过氧化物酶标记兔抗牛IgG，质控线C包被表达纯化的IFN-γ。
2.如权利要求1所述的检测牛结核病IFN-γ和牛副结核病抗体的试纸条，其特征在于，所述检测线T1、T2、质控线C之间的距离是分别5～8mm。
3.如权利要求1所述的检测牛结核病IFN-γ和牛副结核病抗体的试纸条，其特征在于，所述荧光微球的粒径为200～300nm。
4.一种如权利要求1-3任一项所述的检测牛结核病IFN-γ和牛副结核病抗体的试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1:免疫荧光微球分别标记鼠抗牛IFN-γ单克隆抗体和牛副结核蛋白的制备
(1)将免疫荧光微球清洗并活化；
(2)免疫荧光微球分别与鼠抗牛IFN-γ单克隆抗体和牛副结核蛋白进行偶联；
(3)封闭免疫荧光微球上未结合表面基团；
(4)将偶联完成后的免疫荧光微球置于4℃保存；
S2:免疫层析试剂条的制备
(1)将样品垫、荧光微球标记垫分别用2％～5％的BSA浸泡，然后烘干；
(2)将荧光微球标记鼠抗牛IFN-γ单克隆抗体和荧光微球标记牛副结核蛋白按照1:1的质量比混匀，用喷膜机喷到所述标记垫上；
(3)将兔抗牛IFN-γ多克隆抗体稀释至效价的100倍，兔抗牛IgG-HRP(辣根过氧化物酶标记兔抗牛IgG)稀释至效价的1000倍，牛伽马干扰素(IFN-γ)稀释至浓度200ng/mL；
(4)将步骤(3)稀释的溶液分别用喷膜机划线，在NC膜上分别标记为T1(兔抗牛IFN-γ多克隆抗体)、T2(兔抗牛IgG-HRP)、C线(IFN-γ)；T1、T2、C线的之间距离为5mm，最后将试纸条置于37℃烘12小时；
S3:进行组装：
将样品垫、荧光微球标记垫、NC膜、吸水纸依次重叠粘贴在PVC底板上，用切条机将整个大板纵向切成一定规格的试纸条，然后干燥密封储存在4℃，最后将试纸条与塑胶外壳组装形成检测卡。
5.如权利要求4所述的检测牛结核病IFN-γ和牛副结核病抗体的试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤S1(1)中所述活化微球1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的浓度均为50mg/mL。
6.如权利要求4所述的检测牛结核病IFN-γ和牛副结核病抗体的试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤S1(2)中鼠抗牛IFN-γ单克隆抗体和牛副结核蛋白均以1:12的质量比分别与免疫荧光微球进行偶联。
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