[发明专利]用于检测C反应蛋白的试剂盒、其制备方法及用途

说明书

本申请涉及免疫学检测领域。具体而言，本申请涉及一种用于免疫比浊法检测C反应蛋白的试剂盒，其包含含有电解质、促凝剂、表面活性剂、防腐剂和缓冲液的第一试剂组合物，以及含有两种具有不同平均粒径的不溶性载体颗粒群以及保存液的第二试剂组合物。本发明的C反应蛋白检测试剂盒可以用于全血样本C反应蛋白浓度测定，具有灵敏度高、检测上限宽、测试速度快、稳定性好、生产成本低等优点。

技术领域

本申请涉及免疫学检测领域。具体而言，本申请涉及一种全量程C反应蛋白检测试剂盒。

背景技术

人类C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是肝脏在白细胞介素6、肿瘤坏死因子等细胞因子刺激下合成的一种急性期反应蛋白。CRP为五聚体蛋白，由五个相同亚单位非共价联接，相对分子质量为115-140KD。在急性炎症时，血浆CRP浓度可迅速升高达生理浓度的1000倍以上。CRP半寿期约15h，正常人的浓度很低，但在组织损伤、急性感染发生后6-8h开始升高，24-48h达峰值，在炎症反应中变化最为显著。因此，CRP检测成为某些临床疾病早期诊断鉴别及疗效评估的重要指标。

临床常规测定CRP方法为免疫比浊法，测定浓度范围一般为3-200mg/L，存在灵敏度低，无法检测更低浓度水平的CRP，不能作为心脑血管疾病检测。超敏CRP测定试剂灵敏度高，可用于心脑血管疾病的监控，但其测定上限低，不能作为感染性疾病的诊断。此外，用于临床上检测的样本均需先对全血样本进行预先分离，费时费力，难以满足临床快速诊断的需求。为此，以全血为样本的全量程CRP快速检测试剂盒(线性区间不窄于0.5-80mg/L)显得异常迫切及重要。

发明内容

为提升检测灵敏度，目前乳胶比浊试剂主要原材料抗体一般为兔多抗或者鼠单抗，其价格高昂，导致试剂生产成本较高。为此，本申请首次应用廉价易得的羊多抗，通过将不同亲和力的羊多抗与特定粒径范围的不溶性载体颗粒偶联，实现了对CRP的准确检测，在大大降低生产成本的同时，亦能够提高检测灵敏度和检测上限。

此外，现有技术通过使用不同粒径的乳胶微球来提升检测灵敏度，通常对不同粒径的乳胶微球进行单独的抗体包被及封闭，该工艺不仅不涉及多次离心步骤，操作繁琐，且所需离心速度大、离心时间长，因而需要大型高速离心机，而离心速度越大，离心机能离心的体积会急聚变小，严重影响试剂产量。为此，本发明人经过反复摸索，出人意料地发现通过将与抗体孵育后的不同粒径乳胶微球混合在一起离心分离、再共同进行封闭的方法，不仅可将离心次数降至1次，且所需离心速度可降低至8000rmp，使得仪器能离心的体积急剧增加，生产效率大幅提高。

基于上述发现，本发明人开发了新的用于免疫比浊法检测C反应蛋白的试剂盒以及制备抗体包被不溶性载体颗粒的方法。

试剂盒

因此，在第一方面，本发明提供了一种用于免疫比浊法检测C反应蛋白的试剂盒，其包含：

(a)第一试剂组合物，其包含电解质、促凝剂、表面活性剂、防腐剂和缓冲液；和，

(b)第二试剂组合物，其包含：

两种具有不同平均粒径的不溶性载体颗粒群，其中，平均粒径小的不溶性载体颗粒群中所包含的不溶性载体颗粒的表面包被有低亲和力的羊抗人CRP多克隆抗体，平均粒径大的不溶性载体颗粒群中所包含的不溶性载体颗粒的表面包被有高亲和力的羊抗人CRP多克隆抗体；以及，

保存液，其包含稳定剂、表面活性剂、防腐剂和缓冲液；

其中，所述低亲和力的羊抗人CRP多克隆抗体以不低于约1×10^-8M的K_D值结合人CRP，所述高亲和力的羊抗人CRP多克隆抗体以不高于约1×10^-8M的K_D值结合人CRP。