[发明专利]一种用于检测赭曲霉素A的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于检测赭曲霉素A的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括AP链溶液、SP链溶液、b1链溶液、b2链溶液、c链溶液和链霉亲合素功能化磁性颗粒；

所述AP链溶液中的AP链为赭曲霉素A的核酸适体；所述AP链的3’端修饰有生物素基团；

所述SP链溶液中的SP链包括区域1和区域2，所述区域1与所述AP链存在互补碱基序列；所述区域2为级联DNA链置换反应的启动模块；

所述b1链溶液中的b1链3'端修饰有猝灭基团；

所述b2链溶液中的b2链5'端修饰有荧光基团；

所述c链溶液中的c链为游离单链；

所述b1链与所述b2链存在互补碱基序列；

所述b1链与所述c链存在互补碱基序列；

所述b1链与所述SP链区域2存在互补碱基序列；

赭曲霉素A与AP链的结合力＞AP链与SP链的结合力；

b1链与SP链的结合力＞b1链与b2链的结合力；

c链与b1链的结合力＞b1链与SP链的结合力。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述AP链的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述SP链的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述b1链的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述b2链的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述c链的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，SP链和AP链碱基互补序列长度为12～16bp；b1链和b2链碱基互补序列长度为14～18bp。

6.根据权利要求1～4任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述AP链溶液或所述SP链溶液的浓度独立为20～50μmol/L；所述b1链溶液、b2链溶液或所述c链溶液的浓度独立为1～5μmol/L。

7.权利要求1～6任意一项所述试剂盒在定量检测赭曲霉素A中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将AP链溶液和SP链溶液按1：1的溶质摩尔比混合，90～95℃水浴反应5～10min，得到AP/SP双链溶液；

(2)将b1链溶液和b2链溶液按1：1的溶质摩尔比混合，90～95℃水浴反应5～10min，得到b1/b2双链溶液；

(3)将所述AP/SP双链溶液与链霉亲合素功能化磁性颗粒的重悬液混合，25～30℃反应15～20min，得到AP/SP双链修饰的磁性颗粒重悬液；

(4)将待测样品与所述AP/SP双链修饰的磁性颗粒重悬液混合，25～30℃反应30～60min，磁分离弃磁性颗粒，得到上清液；

(5)将所述b1/b2双链溶液、c链溶液和所述上清液混合，0～5℃反应15～25min，得到b1/c双链溶液；

(6)测定所述b1/c双链溶液的荧光发生强度。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，步骤(3)所述链霉亲合素功能化磁性颗粒的重悬液的制备方法包括如下步骤：

①将链霉亲合素功能化磁性颗粒与磷酸盐缓冲液混合，磁分离弃溶液，得到清洗后的链霉亲合素功能化磁性颗粒；

②将所述清洗后的链霉亲合素功能化磁性颗粒重悬于磷酸盐缓冲液中，得到链霉亲合素功能化磁性颗粒的重悬液。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，步骤(6)所述测定的实验条件为：激发波长490nm，发射波长扫描范围510～600nm。