[发明专利]一种用于检测赭曲霉素A的试剂盒及方法

说明书

本发明提供了一种用于检测赭曲霉素A的试剂盒及方法，属于生物检测技术领域。本发明所述试剂盒包括AP链溶液、SP链溶液、b1链溶液、b2链溶液、c链溶液和链霉亲合素功能化磁性颗粒。本发明利用级联DNA链置换反应介导的核酸信号放大策略，实现了赭曲霉素A的灵敏检测。与现有技术相比，本发明提供的试剂盒用于赭曲霉素A的检测，工作时间仅20min，最低检测线为0.056ng/mL。本发明提供的试剂盒用于赭曲霉素A的检测无需核酸工具酶的参与，且信号放大效率高、速度快，具有检测速度快、灵敏度高等优点。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种用于检测赭曲霉素A的试剂盒及方法。

背景技术

赭曲霉素(Ochratoxin)是一类由曲霉菌属和青霉菌属的某些菌种产生的基本结构为苯甲酸异香豆素的次级代谢产物，包含7种结构类似物。其中，赭曲霉素A(OchratoxinA,OTA)广泛存在于谷类、咖啡和酒类等农作物及相关产品中，具有致畸、致突变和致癌作用，是毒性最强和对人类健康威胁最大的一类赭曲霉素。因此，赭曲霉素A的检测在食品安全等领域具有十分重要的意义。目前常用的赭曲霉素A检测方法主要包括色谱法(如高效液相色谱、气相色谱-质谱联用等)、薄层层析发、酶联免疫吸附法等。这些方法虽然具有特异性强、灵敏性高等优点，但也存在操作繁琐、仪器设备昂贵、检测耗时长等缺陷。

核酸适体(aptamer)是利用指数富集配体系统进化技术(Systemic Evolution ofLigands by Exponential Enrichment,SELEX)从人工构建的单链核酸分子文库中筛选得到的能够高亲和力和高特异性结合目标分子的寡聚核苷酸片段。2008年，Curz-Aguado等人成功筛选得到了赭曲霉素A的核酸适体，这为赭曲霉素A的检测打开了新局面。尤其是近年来，通过将核酸适体与赭曲霉素A的识别结合过程与核酸信号放大策略相偶联，一系列高检测灵敏性和特异性的赭曲霉素A检测方法得以建立。但是，这些方法往往需要核酸工具酶的参与，不仅增加了检测成本，而且延长了检测耗时。

发明内容

有鉴于背景技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种无须核酸工具酶参与的快速、灵敏的赭曲霉素A检测试剂盒及方法。

本发明提供了以下技术方案：

一种用于检测赭曲霉素A的试剂盒，所述试剂盒包括AP链溶液、SP链溶液、b1链溶液、b2链溶液、c链溶液和链霉亲合素功能化磁性颗粒；

所述AP链溶液中的AP链为赭曲霉素A的核酸适体；所述AP链的3’端修饰有生物素基团；

所述SP链溶液中的SP链包括区域1和区域2，所述区域1与所述AP链存在互补碱基序列；所述区域2为级联DNA链置换反应的启动模块；

所述b1链溶液中的b1链3'端修饰有猝灭基团；

所述b2链溶液中的b2链5'端修饰有荧光基团；

所述c链溶液中的c链为游离单链；

所述b1链与所述b2链存在互补碱基序列；

所述b1链与所述c链存在互补碱基序列；

所述b1链与所述SP链区域2存在互补碱基序列；

赭曲霉素A与AP链的结合力＞AP链与SP链的结合力；

b1链与SP链的结合力＞b1链与b2链的结合力；

c链与b1链的结合力＞b1链与SP链的结合力。

优选的，所述AP链的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述SP链的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

优选的，所述b1链的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述b2链的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。