[发明专利]一种白及愈伤组织的诱导培养方法

说明书

本发明涉及中药材药物研究技术领域，涉及一种愈伤组织培养方法，具体涉及一种白及愈伤组织的诱导培养方法，包括对白及种子的愈伤组织诱导培养和对愈伤组织的继代培养，所述愈伤组织诱导培养和所述继代培养均采用悬浮培养的方式，且均使用含有植物生长调节剂的MS液体培养基。植物生长调节剂为6‑苄氨基嘌呤、2,4‑二氯苯氧乙酸和萘乙酸。本发明可以易化对白及愈伤组织生长分化最佳条件进行研究的过程，减小毒性次生代谢产物对白及愈伤组织的影响，提供一个相对一致的白及愈伤组织细胞群体等。本发明可以应用到白及愈伤组织悬浮培养生产次生代谢产物的工业化生产中。

技术领域

本发明涉及中药材药物研究技术领域，涉及一种愈伤组织培养方法，具体涉及一种白及愈伤组织的诱导培养方法。

背景技术

白及(Bletilla striata(Thunb.)Rchb.f.)为兰科白及属的多年生草本药用植物，在我国主产于长江流域、甘肃、陕西等地。白及是我国传统的名贵中药材，药用价值广泛。历代药典记录其具有收敛止血、消肿生肌的功效，可用于治疗咯血、吐血、外伤出血、疮疡肿毒、皮肤皲裂等疾病。现代药理学研究表明，白及具有抗菌、抗氧化、抗肿瘤、抗消化性溃疡、免疫调节等作用。除了在药用方面的应用，白及还被用作工业、园艺等的原材料，其用途还在不断拓展，人们对白及的需求量正在急速增加。由于生态环境的破坏和过度采挖，野生白及的种群类型和数量急剧下降，濒临灭绝，急需开展种质资源保护和拓展、新品种选育、种苗快繁等方面的研究，而愈伤组织的诱导和繁育是这些研究的良好基础。因此，建立和优化出白及愈伤诱导和增殖培养的培养基配方和技术体系具有十分重要的基础研究和应用实践的价值。

发明人对白及的愈伤组织诱导和繁育进行了大量研究，在学术论文(不同激素配比对白及愈伤组织诱导、增殖和分化的影响，徐德林等，北方园艺，2016)中公布了一种白及愈伤组织诱导、增殖和分化的方法。其中，白及愈伤组织诱导采用的培养基为含6-苄氨基嘌呤(6-BA)或2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)的MS固体培养基，增殖培养采用的培养基为含6-苄氨基嘌呤(6-BA)或2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)的MS固体培养基。在完成白及愈伤组织诱导后，需要将愈伤组织从诱导培养基中取出，对愈伤组织进行清洗等各种处理，再放入继代培养基中进行增殖(继代)培养。上述操作非常繁琐，从固体的诱导培养基取出愈伤组织以及后续处理的过程易损伤愈伤组织，因愈伤组织生长时有一个生长核心，一旦破坏，愈伤组织就难以恢复分裂和生长。并且选择固体的增殖培养基不利于愈伤组织形成分散性好的游离小细胞团，难以为后续的诱导分化培养提供性质均一的愈伤组织。另外，采用固体的诱导培养基和继代培养基，不利于调节控制培养基中各营养物质和激素等的水平，不利于对诱导培养方法和过程进行优化和完善。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种白及愈伤组织的诱导培养方法，该诱导培养方法采取悬浮培养的方法对白及愈伤组织进行诱导和继代培养，并提供了一种愈伤组织诱导培养和继代培养的培养基。该方法可以易化对白及愈伤组织生长分化最佳条件进行研究的过程，减小毒性次生代谢产物对白及愈伤组织的影响，提供一个相对一致的白及愈伤组织细胞群体等。

为达到上述目的，本发明提出了以下技术方案：

一种白及愈伤组织的诱导培养方法，包括对白及种子的愈伤组织诱导培养和对愈伤组织的继代培养，所述愈伤组织诱导培养和所述继代培养均采用悬浮培养的方式，且均使用含有植物生长调节剂的MS液体培养基。

采用上述技术方案，技术原理为：使用含有植物生长调节剂的MS液体培养基对白及种子进行悬浮培养以诱导愈伤组织的产生；使用含有植物生长调节剂的MS液体培养基对白及愈伤组织进行悬浮培养以促进白及愈伤组织的增殖。

愈伤组织是在离体培养条件下，经植物细胞脱分化和不断增殖所形成的无特定结构的组织。植物外植体(白及种子)在培养基的作用下，经过一个复杂的过程形成愈伤组织。外植体组织受外界条件刺激后，开始改变原来的分裂方向和代谢方式，合成代谢活动加强，大量合成蛋白质和核酸物质，为细胞分裂做准备。