[发明专利]一种鸡GM-CSF蛋白、其单克隆抗体、其制备方法和应用

说明书

本发明一种鸡GM‑CSF蛋白、其单克隆抗体、其制备方法和应用，属于基因工程技术领域。所述鸡GM‑CSF蛋白制备方法包括下述步骤：合成SEQ ID NO.1所示基因序列；制备原核表达载体pGEX‑4T‑1‑GM‑CSF；原核表达载体pGEX‑4T‑1‑GM‑CSF诱导表达鸡GM‑CSF蛋白；纯化得到鸡GM‑CSF蛋白。本发明具有以下优点：化学合成GM‑CSF基因，基因合成无需模板，因而不受基因来源限制，更经济、简便、省时省力；以原核表达系统作为表达载体，具有节省成本、产量高、可大规模制备的优点。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种鸡GM-CSF蛋白、其单克隆抗体、其制备方法和应用。

背景技术

粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colonystimulating factor，GM-CSF)是1997年Burgess A W等首次在小鼠肺组织培养上清中发现的一种能刺激粒细胞和巨噬细胞形成集落的因子，是由T细胞、B细胞、巨噬细胞、内皮细胞等在某些抗原和细胞因子作用下刺激产生的具有多种生物学活性的一类细胞因子。不仅能刺激造血细胞增殖、分化和成熟并从骨髓向外周转移，而且还能活化中性粒细胞、巨噬细胞、及其他单核细胞，在细胞因子网络中占有重要地位，在免疫反应中具有重要作用。所以GM-CSF常用作DNA疫苗的免疫佐剂，以克服DNA疫苗免疫原性差的缺陷。

单克隆抗体技术是将小鼠骨髓瘤细胞和经某种抗原诱导产生的特异性淋巴细胞在体外进行细胞融合,产生能连续传代、稳定分泌特异抗体的杂交瘤细胞。这种杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性,既具有肿瘤细胞无限增殖的能力,又携带有免疫淋巴细胞携带的遗传信息,在人工培养条件下能分泌大量特异性抗体或因子。这种技术克服了免疫淋巴细胞不能在体外繁殖的缺点。与多克隆抗体相比,单克隆抗体只针对单一抗原决定簇,具有理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合的特异性强等特点,来源较为容易,利于标准化和规范化生产,还可无限供应,便于人为处理和质量控制。

发明内容

本发明的目的在于公开了一种鸡GM-CSF蛋白的制备方法。

本发明第二个目的在于公开由上述方法制备得到的鸡GM-CSF蛋白。

本发明第三个目的在于公开了上述鸡GM-CSF蛋白的应用。

本发明第四个目的在于公开了一种鸡GM-CSF蛋白单克隆抗体的制备方法。

本发明第五个目的在于公开由上述方法制备得到的鸡GM-CSF蛋白单克隆抗体。

本发明第六个目的在于公开了上述鸡GM-CSF蛋白单克隆抗体的应用

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种鸡GM-CSF蛋白的制备方法，所述制备方法包括下述步骤：

(1)、合成SEQ ID NO.1所示的鸡GM-CSF基因序列；

(2)、将SEQ ID NO.1序列克隆到pGEX-4T-1载体上，得到原核表达载体pGEX-4T-1-GM-CSF；

(3)、对步骤(2)得到的原核表达载体pGEX-4T-1-GM-CSF用IPTG进行诱导表达；

(4)、对步骤(3)高速离心收集诱导后的菌体进行纯化，得到鸡GM-CSF蛋白。

上述技术方案所述的制备方法，其中，步骤(3)的具体步骤为：将原核表达载体pGEX-4T-1-GM-CSF按照1:100接种于添加氨苄的LB培养基中37℃220rpm震荡培养，培养至OD600为0.6-0.8时，往培养基中添加IPTG至终浓度为1.0mmol/L、37℃继续诱导培养4h，高速离心收集诱导后的菌体。