[发明专利]一种黑曲霉6-4光修复酶及其构建方法有效
| 申请号： | 201910316132.8 | 申请日： | 2019-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN110029099B | 公开（公告）日： | 2020-02-21 |
| 发明（设计）人： | 朱国萍;文斌;王胜地;王鹏;曹正宇;徐蕾;黄士平;汪源;卞命杰 | 申请（专利权）人： | 安徽师范大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京元本知识产权代理事务所 11308 | 代理人： | 范奇 |
| 地址： | 241002 安徽*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 曲霉 修复 及其 构建 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种黑曲霉(Aspergillus niger)6-4光修复酶的编码基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种表达载体，所述的载体为重组质粒，其特征在于：该重组质粒为含有权利要求1所述编码基因的pET-22b(+)重组质粒。
3.一种宿主细胞，其特征在于：所述的宿主细胞为大肠杆菌且含有权利要求2所述的表达载体。
4.一种黑曲霉6-4光修复酶的构建方法：包括以下步骤：
从现有的野生型(wild-type，WT)黑曲霉(Aspergillus niger)中获得6-4光修复酶基因基因An6-4，重新设计核苷酸序列，选择大肠杆菌表达系统偏好的密码子进行优化，得到改造后的如SEQ ID NO.1所示的基因An6-4'；
将改造后的基因An6-4'与pET22b质粒连接，构建具Amp抗性的重组表达载体pET22b-An6-4'；
将pET22b-An6-4'重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞，构建用于An6-4'表达的基因工程菌Rosetta(DE3)/pET22b-An6-4'；
采用Ni2+离子亲和层析法及SDS-PAGE电泳，进行纯化，即可得到黑曲霉6-4光修复酶。
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