[发明专利]一种细胞-寄生菌总DNA的提取试剂、试剂盒及应用与提取方法有效
| 申请号： | 201910316972.4 | 申请日： | 2019-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN109825499B | 公开（公告）日： | 2020-11-06 |
| 发明（设计）人： | 田铃;吴坤钟;曹阳;黄志君 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 周宇 |
| 地址： | 510000 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 细胞 寄生 dna 提取 试剂 试剂盒 应用 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种细胞-寄生菌总DNA的提取方法，其特征在于，用于提取果蝇S2细胞-寄生菌总DNA，包括以下步骤：
将蛋白酶K、EDTA和溶菌酶与TE缓冲液制备成裂解液，其中，将所述溶菌酶干粉用所述TE缓冲液配制成30mg/mL的溶菌酶液，将所述EDTA制备成缓冲液ITL，并将所述缓冲液ITL230μL、所述溶菌酶液180μL和所述蛋白酶K的溶液20μL作为裂解液；将Tris-Cl饱和酚溶液和乙醇制成缓冲液IL；将Tris-Cl饱和酚溶液、氯仿、乙醇、异戊醇制备得到缓冲液GW1；将氯仿、乙醇和异戊醇制备得到缓冲液GW2；
将细胞-寄生菌样本用所述裂解液水浴消化，加入所述缓冲液IL后混匀，得到混合样；其中，所述水浴消化的温度为35-39℃，时间为110-140min；
将所述混合样加入到带有收集管的离心柱里，离心并弃滤液；
加入所述缓冲液GW1到所述离心柱上，离心并弃滤液，加入所述缓冲液GW2到离心柱，离心并弃滤液，加入75％的乙醇离心洗所述离心柱并离心去除残液，将所述缓冲液TE滴加到离心柱并离心得到细胞-寄生菌样本总DNA；其中，去除所述残液后，还包括静置3-5min。
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