[发明专利]一种细胞-寄生菌总DNA的提取试剂、试剂盒及应用与提取方法

说明书

本发明提供了一种细胞‑寄生菌总DNA的提取试剂、试剂盒及应用与提取方法，属于分子生物技术及医药卫生领域。本发明提供的细胞‑寄生菌总DNA的提取试剂、试剂盒及应用与提取方法，通过融合溶菌酶和蛋白酶K，配制成提取缓冲液，并制备成试剂盒，能较好的提高细胞‑寄生菌总DNA提取的效率，并且能提高提取的纯度；具有较好的医药和食品卫生实际应用价值。

技术领域

本发明涉及分子生物技术及医药卫生领域，具体而言，涉及一种细胞-寄生菌总DNA的提取试剂、试剂盒及应用与提取方法。

背景技术

目前，总DNA提取试剂盒主要是针对组织、血液、以及动物分泌物中基因组DNA、线粒体DNA或是其中病毒DNA的抽取，专门针对寄主细胞及病原细菌总DNA提取的试剂盒非常少，且抽提效率低。在寄主和寄生菌互作研究中，有效获得细胞与寄生菌整体的DNA或是RNA显得尤为重要。经实验证实，目前研发的抽提寄主和寄生菌总核酸DNA实验方法抽提细胞及其寄生菌的总DNA含量较低(1.5×10⁶果蝇S2细胞及其中的寄生菌提取量为200～500ng)，无法满足实验对提取效率和质量的需要。

发明内容

本申请实施例提供了一种细胞-寄生菌总DNA的提取试剂、试剂盒及应用与提取方法，能较好的提高样本总DNA的提取效率和质量，满足实验研究或是相关检测的需求。

为了实现本发明的上述目的，采用以下技术方案：

本申请第一方面，提供了一种细胞-寄生菌总DNA的提取试剂，提取试剂包括蛋白酶K和溶菌酶。

在实施例中，通过溶菌酶和蛋白酶K的共同作用，能同时消解细胞和寄生菌结构，提高总DNA提取效率的目的，同时能有效降解细胞中的蛋白等，避免影响DNA的提取质量。

溶菌酶(lysozyme)又称胞壁质酶(muramidase)或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶(N-acetylmuramideglycanohydrlase)，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。

蛋白酶K是一种从白色念珠菌分离出来的强力蛋白溶解酶，具有很高的比活性，是DNA提取的关键试剂。该酶在较广的pH范围(4-12.5)内及高温(50-70℃)下均有活性，可用于质粒或基因组DNA、RNA的分离。在DNA提取中，主要作用是酶解与核酸结合的组蛋白，使DNA游离在溶液中，以便随后进一步抽提DNA。

在前述第一方面的一些实施例中，提取试剂还包括Tris-Cl饱和酚溶液、EDTA、氯仿、异戊醇以及TE缓冲液。

在实施例中，提取DNA的过程中，需要保证DNA不被酶降解，或者其他因素影响，选择缓冲液，能较好的起到保护DNA的作用，同时试剂能使一些酶类变性导致其失活。

本申请第二方面，提供了上述的细胞-寄生菌总DNA的提取试剂在提取细胞-寄生菌总DNA中的应用。

本申请第三方面，提供了上述的细胞-寄生菌总DNA的提取试剂在制备细胞-寄生菌总DNA的提取试剂盒中的应用。

本申请第四方面，提供了一种细胞-寄生菌总DNA的提取试剂盒，提取试剂包括蛋白酶K和溶菌酶。

在实施例中，该试剂盒通过溶菌酶和蛋白酶K的共同作用，能同时消解细胞和寄生菌结构，达到提高总DNA含量的目的，同时能将细胞中的蛋白等降解，避免蛋白影响DNA的提取。

在前述第四方面的一些实施例中，提取试剂盒还包括提取细胞-寄生菌总DNA的缓冲试剂，缓冲试剂由Tris-Cl饱和酚溶液、氯仿、乙醇、异戊醇以及TE溶液中的至少一种制得。