[发明专利]一种萝卜硫素的提取方法及黑芥子酶磁性微球

权利要求书

1.一种萝卜硫素的提取方法，其特征在于，该方法包含：

(1)称取西兰花种子，加热翻炒，将炒制的西兰花种子榨油除去油脂，得到油枯饼；

(2)将油枯饼粉碎成小颗粒，于水中浸泡，搅拌，倾倒出上清液，该操作进行一次以上，合并上清液，得到萝卜硫苷提取液；

(3)向萝卜硫苷提取液中加入黑芥子酶磁性微球，其中，黑芥子酶磁性微球的加入量为西兰花种子的重量的千分之五，搅拌进行酶解，用磁铁吸附回收黑芥子酶磁性微球，得到萝卜硫素提取液；

(4)采用3～6倍西兰花种子重量的二氯甲烷萃取萝卜硫素提取液，得到含有萝卜硫素的二氯甲烷萃取液，浓缩，得到浓缩液；

(5)将浓缩液用其自身重量5～10倍的乙腈溶解，倾倒出上清液，浓缩，再得到浓缩液；

(6)将步骤(5)得到的浓缩液用其自身重量3～5倍的食用乙醇溶解，倾倒出上清液，浓缩，得到萝卜硫素；

所述黑芥子酶磁性微球的制备方法如下：

S1.将氯化铁、醋酸钠和聚醚酰亚胺于乙二醇中，超声，然后在150～250℃下反应，待反应结束后，磁场分离，获得四氧化三铁磁性微球；氯化铁选用FeCl ₃·6H ₂ O，该FeCl ₃ ·6H₂ O与醋酸钠和聚醚酰亚胺的质量比为2：6：5；

S2.将西兰花种子于液氮中研磨成粉，加入Tris-HCl缓冲液，搅拌，过滤，滤液于0～4℃条件下离心，收集上清液，该上清液为黑芥子酶的粗提液，向黑芥子酶的粗提液中加入乙醇，搅拌，在4℃条件下离心，收集上清液，4℃条件下透析，经过透析后的液体为西兰花种子中的黑芥子酶液；

S3.将所述四氧化三铁磁性微球于戊二醛溶液中，超声，30～50℃反应，磁铁分离，然后加入所述黑芥子酶液进行固化，后处理，进行磁场分离，洗掉未结合的酶液，冷冻干燥，获得所述的黑芥子酶磁性微球。

2.根据权利要求1所述的萝卜硫素的提取方法，其特征在于，在步骤S2中，所述Tris-HCl缓冲液的浓度为0.2mol/L，pH值为7.5；所述西兰花种子的质量和Tris-HCl缓冲液的体积之比为2g：5mL；所述离心转速 为12000r/min。

3.根据权利要求1所述的萝卜硫素的提取方法，其特征在于，在步骤S3中，所述四氧化三铁磁性微球的质量与戊二醛溶液和黑芥子酶液的体积之比为1g：250mL：250mL；所述戊二醛溶液的质量体积分数为0.5％；所述固化在25℃条件下固化20h。

4.根据权利要求1所述的萝卜硫素的提取方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述加热温度为100～140℃。

5.根据权利要求1所述的萝卜硫素的提取方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述油枯饼被粉碎成10～50目的小颗粒。