[发明专利]一种萝卜硫素的提取方法及黑芥子酶磁性微球

说明书

本发明公开了一种萝卜硫素的提取方法及黑芥子酶磁性微球，该方法包含：(1)西兰花种子加热翻炒，榨油除去油脂，得到油枯饼；(2)将油枯饼粉碎成小颗粒，于水中浸泡提取，得到萝卜硫苷提取液；(3)向萝卜硫苷提取液中加入黑芥子酶磁性微球，酶解，用磁铁吸附回收黑芥子酶磁性微球，得到萝卜硫素提取液；(4)采用二氯甲烷萃取萝卜硫素，得到含有萝卜硫素的二氯甲烷萃取液，浓缩；(5)将浓缩液用乙腈溶解，倾倒出上清液，浓缩，再得到浓缩液；(6)将步骤(5)得到的浓缩液用食用乙醇溶解，倾倒出上清液，浓缩，得到萝卜硫素。本发明的方法通过固化的黑芥子酶磁性微球为催化剂，将萝卜硫苷水解成萝卜硫素，萝卜硫素纯度高达95％。

技术领域

本发明属于天然产物提取技术领域，具体涉及一种萝卜硫素的提取方法及黑芥子酶磁性微球。

背景技术

西兰花是一种广受欢迎的蔬菜，其种子含有萝卜硫苷，萝卜硫苷在西兰花种子自身含有的黑芥子酶的作用下，降解为萝卜硫素，萝卜硫素是迄今为止蔬菜中发现的抗癌效果最好的活性物质，具有多种生理活性。日本营养学家福家洋子教授等通过试验验证萝卜硫素有治疗癌症的作用；英国科学家发现萝卜硫素将有助于人们对癌细胞的抵抗能力，降低患癌症的危险；美国约翰霍普金斯大学医学院的Brassica Chemooprotection实验室发现萝卜硫素可激活人体自身的抗癌物质；日本金泽大学的大田嗣人发现萝卜硫素具有抑制肥胖的作用；日本千叶大学社会精神保健教育中心于2016年8月宣布萝卜硫素具有预防抑郁症和抑郁症复发的功效；瑞典哥德堡大学研究成果发表在2017年6月的国际顶级刊物《Science Translational Medicine》上：发现萝卜硫素具有降血糖的功效。

2015年3月我国国家食品药品监督管理总局受理了美国Brassica公司的“西兰花种子提取物”为新食品原料(卫食新进申字(2015)第0002号)的申请，并于2017年6月8日正式批准“西兰花种子提取物”为新食品原料。

目前，国内外对萝卜硫素的提取工艺主要采用西兰花种子粉末中加大量水，利用其自身的黑芥子酶的作用将萝卜硫苷水解为萝卜硫素，再经过多次萃取、分离得到纯的萝卜硫素，此方法存在收率低、成本高等问题，一般每公斤西兰花种子得到0.5～1克左右的萝卜硫素，即产率为0.05％～0.1％，溶剂消耗量为西兰花种子重量的20倍左右，且种子在存放过程中有效成分会逐渐大幅降低。

而且，现有的方法得到的萝卜硫素的纯度较低，如中国专利CN108048498A，公开了一种萝卜硫素提取工艺，该工艺提取的萝卜硫素含量在20.8％，经过硅胶柱层析后萝卜硫素含量为30.1％。如中国专利CN102898341A，公开了一种高纯度萝卜硫素的提取纯化方法，该方法获得的萝卜硫素纯度为60％。如中国专利CN101544995A，公开了一种萝卜硫素的提取方法，该方法提取的萝卜硫素纯度为2.91％，经过硅胶柱层析后纯度为24.30％，经过反相硅胶柱层后纯度为95.10％，但是产率极低，1.0kg西兰花干燥种子才能得到937.5mg纯度为95.10％的萝卜硫素，即产率为0.094％。

发明内容

本发明的目的是提供一种萝卜硫素的提取方法及黑芥子酶磁性微球，该方法解决了现有方法收率低的问题，能够得到高纯度的萝卜硫素。

为了达到上述目的，本发明提供了一种黑芥子酶磁性微球的制备方法，该方法包含：

(1)将氯化铁、醋酸钠和聚醚酰亚胺于乙二醇中，超声，然后在150～250℃下反应，待反应结束后，磁场分离(外加磁铁吸附)，获得四氧化三铁磁性微球；

(2)将西兰花种子于液氮中研磨成粉，加入Tris-HCl缓冲液，搅拌，过滤，滤液于0～4℃条件下离心，收集上清液，该上清液为黑芥子酶的粗提液，向黑芥子酶的粗提液中加入乙醇，搅拌，在4℃条件下离心，收集上清液，4℃条件下透析，经过透析后的液体为西兰花种子中的黑芥子酶液；