[发明专利]鼠肉与山羊肉、绵羊肉多重PCR检测试剂盒及鉴定方法

说明书

本发明涉及食品检测技术领域，是一种鼠肉、山羊肉与绵羊肉多重PCR检测试剂盒，其特点是，它包含：动物组织线粒体DNA提取体系和三种多重PCR反应体系(阳性对照反应体系、阴性对照反应体系和鉴定反应体系)。PCR反应总体系为50μL，其中含有反应缓冲液5μL，dNTP 2‑5μL，MgCl₂3μL，Taq DNA聚合酶1‑5μL，每种引物0.5‑2μL，待检样本DNA 1‑3μL，余为双蒸馏水。鼠肉、山羊肉与绵羊肉多重PCR鉴定方法是利用细胞色素b具有的种属特异性设计三种特异寡核苷酸引物、确定反应程序和结果判定等步骤，能够同时区别鼠肉、山羊肉及绵羊肉的特异性；具有简便、快速、检测结果可靠等优点。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术在肉制品检测领域的应用，更具体地说，是一种鼠肉(大白鼠、小白鼠、豚鼠、褐家鼠)、山羊肉与绵羊肉DNA快速鉴定试剂盒及检测方法。

背景技术

肉类食品属民生食用产品，其质量的好坏关系人民群众健康和生命安全。日常生活中，我们食用的羊肉多为绵羊肉和山羊肉。山羊肉为牛科动物青羊的肉。补虚助阳。治虚劳内伤，筋骨痹弱，腰脊酸软，阳痿，带下，不孕。山羊肉中有一种传统的优质羊肉叫柏籽羊肉，素以鲜嫩清香、无腥膻味而闻名，被誉为“土人参”“补心丸”。上世纪80年代以来，张勇飞等专家根据《黄帝内经˙素问˙萎论》“脾主身之肌肉”原理和现代生物分子学理论，以中药为手段，可使普通山羊肉转化为柏籽羊肉，作为药膳食用。绵羊肉肌肉呈暗红色，肉纤维细而软，肌肉间夹有白色脂肪，脂肪较硬且脆。山羊肉肉色较绵羊肉淡，有皮下脂肪，只在腹部有较多的脂肪，肉有膻味。绵羊肉的脂肪含量会更高一些，山羊肉它最重要的特点就是胆固醇含量是比较低的，所以说对于心脑血管疾病以及心脏病等等能够起着一定的预防功效，所以在日常生活当中患有高血脂，高血压以及老人们最好吃山羊肉。

目前肉制品市场上鼠肉冒充羊肉事件频发。因生鼠肉是粉色的，和羊肉的色泽、纹路接近，不法商贩为节约成本购入未经检验检疫的老鼠肉，添加明胶、胭脂红等冒充羊肉，以肉卷、肉串、肉丸、火腿肠等形式销售至各地农贸市场。大约75％的人类感染可能来自不同途径直接或间接接触的动物产品，鼠属于啮齿类的哺乳动物，繁殖速度快，数量多，对居住的环境和食物要求不高，是多种传染病病原的储存宿主和主要传染源，鼠体内的部分病毒即便通过高温加热也很难被消除或减弱。目前，据报道用于肉类产品掺假的鼠类主要来源于医学实验室的小白鼠、大白鼠和豚鼠；野外捕获的田鼠、褐家鼠等。实验室鼠虽经检疫，但在实验室制作动物模型或临床用药前评估时，喂养鼠饲料添加一些特定药品或直接在鼠体内注射药品，这些药品在肉里大量存在，人食用后会导致机体损害！部分野外老鼠是食用鼠药毒死的，食用者存在中毒的风险，因此鼠肉是绝不允许被摆上餐桌的。掺假肉制品的出现会影响消费者的身体健康和生命安全。此外，这些掺假肉制品出口到国外会严重损害食品企业形象及国家信誉。基于食品安全性与质量监督的需要，有必要对食品中动物源性成分进行检测。

国内外常用的检测掺假肉的方法有感官鉴定技术、光谱色谱分析、酶联免疫吸附技术、常规PCR，实时荧光定量PCR和数字PCR等。感官鉴定技术需要检验人员对各物种的细微形态有较强的认识；近红外光谱主要对肉类中的含氢基团进行检测，其缺点是需大量样品建立与分析模型，且检测精度不高；色谱分析仅适用于新鲜和冷冻肉类；在肉类加工过程中，蛋白质易变性而使酶联免疫反应失效，所以酶联免疫吸附技术只适合于未加工过的肉制品；电子鼻和电子舌在硬件结构和识别算法上仍存在仿生性差的缺点；目前对于动物源成分检测的国家标准和行业标准主要采用PCR法。实时荧光定量PCR和数字PCR能够同时进行特异性识别和量化，提供更精确和可靠的定量数据。但应用的仪器、试剂价格昂贵，且耗时长，对检测技术人员要求高，操作难度大，不适宜快速批量检测使用。