[发明专利]一种高产抗菌肽枯草芽孢杆菌培养基及液态发酵方法

说明书

本发明公开了一种高产抗菌肽枯草芽孢杆菌培养基，包括种子培养基和发酵培养基，其特征在于，所述培养基的成分及在发酵液中的含量分别为：葡萄糖3‑10g/L、玉米淀粉15‑25g/L、豆粕粉15‑25g/L、玉米浆干粉3‑10g/L。本发明通过采用含有特定粗蛋白质（干基）及特定含量的豆粕粉和玉米浆干粉、特定含量的葡萄糖和玉米淀粉共四种组分的发酵培养基，取特定的菌种进行接种，并采用特定培养条件的液态发酵方法，制备得到的发酵液的抗菌肽效价≥14000IU/ml，较初始工艺发酵活性4100IU/ml提高了3倍以上，且发酵培养基的成本降到初始工艺的1/4。

技术领域

本发明涉及微生物发酵技术领域，尤其涉及一种高产抗菌肽枯草芽孢杆菌的发酵培养基及液态发酵方法。

背景技术

抗菌肽是生物体内经诱导产生的一种具有生物活性的小分子多肽，具有抗菌谱广、耐酸碱以及热稳定性等特点。抗菌肽在医药、农业和工业上具有广阔的应用前景，已有多种抗菌多肽正在进行临床前的可行性研究。

但是，抗菌肽的来源是制约其发展应用的一个关键问题。抗菌肽在动物体内含量极微，从动物体内提取抗菌肽产量低、费时长、工艺复杂、费用昂贵，无法实现大规模生产。化学合成和基因工程成为获取抗菌肽的主要手段，可是化学合成肽类，成本较高，通过基因工程技术，在微生物中直接表达抗菌肽基因，可能造成宿主微生物自杀而不能获得表达产物。因此，如何实现产业化生产是抗菌肽应用必须解决的问题。

发明内容

针对现有技术存在的缺陷与不足，本发明的首要目的在于提供一种高产抗菌肽枯草芽孢杆菌培养基。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种高产抗菌肽枯草芽孢杆菌培养基，包括种子培养基和发酵培养基，所述培养基的成分及在发酵液中的含量分别为：葡萄糖3-10g/L、玉米淀粉15-25g/L、豆粕粉15-25g/L、玉米浆干粉3-10g/L。

其中，所述培养基的成分及在发酵液中的含量分别为：葡萄糖5g/L、玉米淀粉20g/L、豆粕粉20g/L、玉米浆干粉5g/L。

其中，所述豆粕粉的粗蛋白质（干基）≧50%；所述玉米浆干粉的粗蛋白质（干基）≧42%；采用包含较高含量的粗蛋白质（干基）的豆粕粉和玉米浆干粉等的培养基，制备得到的发酵液的抗菌肽效价≥14000IU/ml；而如果采用的豆粕粉和/或玉米浆干粉的粗蛋白质（干基）过低，会导致发酵过程延滞期长、菌体生长缓慢，代谢产物抗菌肽的活性受到较大影响。

一种包含上述高产抗菌肽枯草芽孢杆菌培养基的液态发酵方法，包括如下步骤：

1）种子培养基：葡萄糖3-10g/L、玉米淀粉15-25g/L、豆粕粉15-25g/L、玉米浆干粉3-10g/L，调节pH为6.8-7.2；

2）种子发酵液的制备：取保存于固体培养基上的菌种，接种至50ml/250ml（三角瓶）的种子培养液中，于31-33℃、摇床转速150r/min、培养时间12-15h；

3）发酵初始培养基：葡萄糖3-10g/L、玉米淀粉15-25g/L、豆粕粉15-25g/L、玉米浆干粉3-10g/L，调节pH为6.8-7.2；

4）发酵培养过程：将上述培养好的种子发酵液接种至100ml/500ml（带挡板的三角瓶）的发酵初始培养基中，于31-33℃、摇床转速150r/min、培养时间22-26h；

5）检测：发酵结束后，取发酵液，并对发酵液进行处理，然后检测发酵液中的抗菌肽。

其中，步骤2）中，所述菌种为产抗菌肽的枯草芽孢杆菌，保存于广东省微生物种质资源库，菌株编号为GW-1-1601-1615-01。

其中，所述接种量为3-7%（v/v）。