[发明专利]一种植物内生细菌蜡样芽孢杆菌NJSZ-13微生态制剂及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种植物内生细菌蜡样芽孢杆菌NJSZ‑13微生态制剂及其制备方法和应用，属于微生物技术领域。将蜡样芽孢杆菌NJSZ‑13进行活化并发酵，得到发酵液；将发酵液离心处理，弃上清液，得到细胞悬浮液；将细胞悬浮液分散在生理盐水中并混合均匀，然后将细胞悬浮液与壁材溶液混合，通过喷雾干燥得到微生态制剂。本发明采用喷雾干燥法制备植物内生细菌蜡样芽孢杆菌NJSZ‑13微生态制剂，通过对喷雾干燥参数的有效控制，使得微生态制剂中细菌存活率达到83.08％，平均每克微生态制剂中含菌量达到13.05×10⁹cfu。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种植物内生细菌蜡样芽孢杆菌NJSZ-13微生态制剂及其制备方法和应用。

背景技术

松材线虫病又称松材线虫萎蔫病，是我国目前最为严重的自然灾害之一，给我国造成巨大的经济和生态资源损失。目前防治松材线虫病主要采用的化学方法是向患病的树木和疫区喷洒化学农药。然而，化学农药具有高毒、高残留的特点，会对空气、水体、土壤环境造成污染，间接地对人类造成危害，因此，积极从自然界寻找对环境友好的，性价比高的微生物用于防治势在必行。

蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)是一种革兰氏阳性大杆菌，主要分布于空气、土壤、水及植物中，能产生抗逆性强的内生芽孢。与营养体细胞相比，芽孢对高温、干燥、紫外线辐射等恶劣环境都具有很强的抵抗能力，在植物的表面容易存活、定殖，而且其抑菌范围较广泛，对许多病原真菌引起的植物病害能够起到有效的防治作用。除此之外，芽孢杆菌还具有不污染环境，对人畜无毒无害的优点；在芽孢杆菌制剂的生产方面，其工艺简单，施用方便，不容易产生抗药性，符合现代社会对农业生产及有害生物综合防治的要求，因此渐渐成为生物防治研究中的重点研究项目。蜡样芽孢杆菌应用于农林业，都要通过发酵来使细胞富集，可直接制成活菌制剂，也可提取生理活性物质制成杀虫制剂。目前较多的是将蜡样芽孢杆菌制成活菌制剂，对于芽孢杆菌活菌制剂，发挥主要作用的是孢子。在生产实践中发现，从发酵到制成成品封装保存，蜡样芽孢杆菌的芽孢数和活性总会有所降低，因此，对蜡样芽孢杆菌作用机制需要进一步研究。

喷雾干燥法是以单一工序将溶液、乳液、悬浮液加工成干燥制品的一种干燥方法。其干燥速率大，干燥时间短，通常为15-40s，物料温度较低，产品的分散性和溶解性较好，生产过程简单，适于连续化生产。微生物对喷雾干燥的温度及脱水很敏感，所以，如果喷雾干燥应用于发酵剂制备必须注意微生物的存活率，但是现有技术中喷雾干燥法制备菌剂的微生物存活率比较低。现有技术申请号为2014105601936，发明名称为一种芽孢杆菌及其菌剂的制备方法，在制备得到的菌体发酵液中加入喷雾保护剂，通过对喷雾保护剂种类和喷雾干燥参数的控制，得到芽孢杆菌的菌体存活率最大仅为76％。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种植物内生细菌蜡样芽孢杆菌NJSZ-13微生态制剂，使其具有较高的细菌存活率。本发明的另一目的在于提供一种植物内生细菌蜡样芽孢杆菌NJSZ-13微生态制剂的制备方法。本发明还有一个目的是提供一种植物内生细菌蜡样芽孢杆菌NJSZ-13微生态制剂的应用。

技术方案：为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种植物内生细菌蜡样芽孢杆菌NJSZ-13微生态制剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)将蜡样芽孢杆菌NJSZ-13进行活化并发酵，得到发酵液；

(2)对发酵液离心处理，弃上清液，得到细胞悬浮液；

(3)将细胞悬浮液分散在生理盐水中并混合均匀，然后与壁材溶液混合，通过喷雾干燥得到微生态制剂；设置喷雾干燥参数：进风口温度为80-120℃，喷雾压力为0.1-0.2MPa，蠕动速度为5-20RPM，真空度为0.02-0.04MPa；所述壁材溶液为喷雾保护剂与无菌水的混合物，喷雾保护剂与无菌水的料液比为(0.5-3)∶10。