[发明专利]海藻中OA、DTX1和DTX2三种腹泻性贝毒的检测方法

说明书

本发明公开一种海藻中OA、DTX1和DTX2三种腹泻性贝毒的检测方法，能够对饲料饵料的海藻以及水体环境的污染情况进行提前的风险预警，所采取的的技术方案是：海藻中OA、DTX1和DTX2三种腹泻性贝毒的检测方法，其特征在于包括以下步骤：（1）海藻样品的预处理：对海藻样品进行研磨打碎；（2）浓缩富集：称取1g预处理后的海藻样品，加入10 mL甲醇，漩涡混合30s，超声提取10 min后，1000 r/min离心10 min，取1 mL上清液，加入PSA吸附剂50‑250mg，漩涡混合30 s后，6000 r/min离心5 min，上清液过0.22μm PVDF滤膜；（3）采用液相色谱串联质谱仪进行检测。与现有技术相比，本发明选取了PSA吸附剂作为净化剂，简化了前处理过程，优化了净化效果，并且本发明的方法线性稳定，定量限适中。

技术领域

本发明涉及毒素的检测方法，具体是海藻中OA、DTX1和DTX2三种腹泻性贝毒的检测方法。

背景技术

腹泻性贝毒(Diarrhetic Shellfish Poisoning，DSP)是由有毒赤潮藻类鳍藻属和原甲藻属的一些种类产生的脂溶性多环醚类生物活性物质。其化学结构特征是聚醚或大环内酯化合物。根据这些成分的碳骨架结构可以将它们分成三组：(l)酸性成分：软海绵酸(OA)和其天然衍生物—鳍藻毒素(DTXs)。(2)中性成分：聚醚内酯—蛤毒素(PTXI-Vn)。(3)其它成分：磺化毒物、紫夷贝毒素(YTX)及其衍生物。其中酸性成分中的OA、DTX1和DTX2是DSP中最主要的三种成分。

腹泻性贝毒可在贝等滤食性动物体内富集，因而检测贝类DSP相对容易，即便如此，贝类DSP检测方法也主要集中在OA上，主要的检测方法有： 小白鼠生物试验法、免疫分析（Immunoassays）、高效液相色谱（High-performance liquid chromatography，HPLC）、液相色谱－质谱联用（Liquidchromatography-massspectrometry，LC/MS）。目前尚未有对藻类DSP的直接检测，更没有同时检测OA、DTX1和DTX2这三种成分。能够同时检测海藻中OA、DTX1和DTX2这三种成分，对海藻研究及基于海藻作为饵料的水产养殖起到标志性的意义。

发明内容

为建立快速有效地检测海藻中的DSP，本发明公开一种海藻中OA、DTX1和DTX2三种腹泻性贝毒的检测方法，能够对饲料饵料的海藻以及水体环境的污染情况进行提前的风险预警，所采取的的技术方案是：

海藻中OA、DTX1和DTX2三种腹泻性贝毒的检测方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）海藻样品的预处理：对海藻样品进行研磨打碎；

（2）浓缩富集：称取1g预处理后的海藻样品，加入10 mL甲醇，漩涡混合30s，超声提取10 min后，1000 r/min离心10 min，取1 mL上清液，加入PSA吸附剂50-250mg，漩涡混合30s后，6000 r/min离心5 min，上清液过0.22 μm PVDF滤膜；

（3）采用液相色谱串联质谱仪进行检测。

进一步地，步骤（3）中的液相色谱条件为：

色谱柱：ACQUITYTM UPLC BEH C18 (1.7μm, 2.1 mm i.d.×100 mm)；色谱柱温度：40℃；流动相：A:乙腈; B:含有0.1%甲酸溶液(B)；流速：0.25 mL/min；进样量：10 μL；梯度洗脱程序表为

；

质谱条件为：

自动调谐，优化的质谱条件如下所示：电离方式：正离子(ESI-)；电离电压：2.50kV；锥孔电压：48 V；离子源温度：150℃；锥孔反吹气流速：50 L/h；脱溶剂气温度：450℃；脱溶剂气流速：900 L/h；氩气流速：0.12 mL/min；其他参数为