[发明专利]个体化的粒细胞抗癌活性检测

说明书

本发明涉及个体化的粒细胞抗癌活性检测，包括肿瘤标本的取材、肿瘤单细胞悬液的制备、去除红细胞及杂细胞、纯化肿瘤细胞、单细胞软琼脂克隆团的获取和细胞培养、粒细胞制备和粒细胞抗癌活性检测（CKA）。本发明通过原代培养获得的肿瘤细胞，作为靶细胞筛选高抗癌活性的粒细胞，对临床肿瘤的治疗具有极好的指导作用，避免凭借临床经验盲目用药，降低抗癌药物作用的不良反应，为临床治疗提供客观依据，同时其作为靶细胞筛选高抗癌活性的粒细胞，在制备过程中步骤严谨，粒细胞能够有效作为个体化的粒细胞抗癌活性检测的检测项目，保证检测数据的严谨性与准确性,为临床应用提供数据支持。

技术领域

本发明涉及粒细胞抗癌活性检测技术领域，具体为个体化的粒细胞抗癌活性检测。

背景技术

粒细胞是机体固有免疫系统的重要组成部分，在调节机体免疫应答过程中发挥重要作用。近年来研究表明：粒细胞不仅具有抗菌作用，而且具有显著的抗肿瘤作用。

研究表明：癌症对不同化疗药物或不同化疗药物组合方案的敏感性差异较大，即使是同一组织类型的肿瘤，对同一药物的敏感程度也不相同。究其原因传统治疗方法忽略了肿瘤的异质性，对不适合标准药物治疗的患者进行标准化治疗，不仅增加了患者的经济负担，同时也增加了毒副作用，不利于提高患者的生活质量。

对于粒细胞，作为生物制剂，同一来源的粒细胞对不同肿瘤的杀伤活性不同；同一肿瘤，不同的粒细胞对其的杀伤活性也不同。因此需要切实可行的技术方法筛选出抗癌活性高的粒细胞，为临床提供治疗方案依据

目前国内癌细胞研究多采用癌细胞株的方式，在传代培养的过程中，随着培养时间的延长或培养环境的改变，癌细胞的特性会发生改变。这正是体外筛选出的高杀癌活性的药物或粒细胞往往体内杀癌效果不佳或无效果的原因。与此相反，肿瘤组织的原代培养获取的肿瘤细胞，最接近和反映体内生长特性，可以为药物敏感性试验、免疫学研究、遗传学特性及肿瘤的治疗等提供理想的生物学模型。通过原代培养获得的肿瘤细胞，作为靶细胞筛选高抗癌活性的粒细胞，对临床肿瘤的治疗具有极好的指导作用，避免凭借临床经验盲目用药，降低抗癌药物作用的不良反应，为临床治疗提供客观依据。

发明内容

本发明的目的在于提供个体化的粒细胞抗癌活性检测，以解决上述背景技术中提出的目前国内癌细胞研究多采用癌细胞株的方式，在传代培养的过程中，随着培养时间的延长或培养环境的改变，癌细胞的特性会发生改变。这正是体外筛选出的高杀癌活性的药物或粒细胞往往体内杀癌效果不佳或无效果的原因的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：个体化的粒细胞抗癌活性检测，包括以下步骤：

1）肿瘤标本的取材；

2）肿瘤单细胞悬液的制备；

3）去除红细胞及杂细胞；

4）纯化肿瘤细胞；

5）单细胞软琼脂克隆团的获取和细胞培养；

6）粒细胞制备；

7）粒细胞抗癌活性检测（CKA）。

优选的，所述肿瘤标本的取材为，新鲜无菌癌组织是手术切除的未经放射治疗和抗肿瘤化学药物治疗的。取新鲜癌组织1cm³，置于DMEM（含100U/ml青霉素和100ug/ml链霉素）中，4℃储存不超过3小时。置于超净工作台中，用无菌生理盐水将标本组织冲洗3次；用锐利的眼科剪小心剔除可见血管及坏死组织，迅速浸入含有双抗（青霉素200U/ml，链霉素200mg/ml）及二性霉素2mg/ml的D-Hank’s液中。

优选的，所述肿瘤单细胞悬液的制备，其中，