[发明专利]一种基于量子点构建的网状结构检测microRNA-155的方法

权利要求书

1.一种基于量子点构建的网状结构检测microRNA-155的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备核酸序列修饰的量子点：

将核壳结构的CdSeTe/ZnS量子点表面的羧基活化后置于核酸序列A1的溶液中，孵育15～20h，得到核酸序列A1修饰的量子点，标记为A1-QDs；

所述核酸序列A1为：5’-GTTGCCATTGAC-NH₂-3’；

(2)制备核酸序列修饰的AuNPs@SiO₂复合材料：

将断裂二硫键后的核酸序列HP的溶液加入AuNPs@SiO₂的分散液中，于35～38℃的黑暗中孵育15～24h，之后采用巯基己醇阻断AuNPs@SiO₂上剩余的活性结合位点，得到核酸序列HP修饰的AuNPs@SiO₂复合材料，标记为HP-AuNPs@SiO₂；

所述核酸序列HP为：

5’-SH-ACCTCACACTGTTAATGACCCCTATCACGATTAGCATTAA-3’；

(3)对microRNA-155进行荧光检测：

将步骤(2)制备得到的HP-AuNPs@SiO₂、外切酶ExoⅢ和microRNA-155于30～40℃中孵育1～2h之后离心、净化得到的沉淀标记为H1-AuNPs@SiO₂；

向H1-AuNPs@SiO₂中加入步骤(1)制备得到的A1-QDs和核酸序列A2，于37℃中孵育1～2h，然后记录溶液的荧光强度；

所述核酸序列A2为：5’-CAATGGCAACCATTAACAGT-3’。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中活化核壳结构的CdSeTe/ZnS量子点表面的羧基的方法为：

向所述CdSeTe/ZnS量子点的分散液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的混合液，于30～40℃中孵育1～2h。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述EDC和NHS的混合液中EDC和NHS的用量比为1:1。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述EDC和NHS的混合液的浓度为1nM。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的核壳结构的CdSeTe/ZnS量子点采用如下方法制备：

调节CdCl₂和半胱氨酸的水溶液的pH值为11～12，后脱氧，于95℃加入KHTe溶液，回流20～30min，之后加入KHSe溶液，继续回流20～30min得到CdSeTe，然后于惰性气氛下，将CdSeTe加入到ZnCl₂溶液中，于pH11～12，的条件下，于60～70℃加入Na₂S溶液，回流30～50min，即得。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中断裂二硫键后的核酸序列HP由如下方法制备：

将核酸序列HP加入到二硫键还原剂与NaCl的混合溶液中，于3～5℃中，孵育1～1.5h即得。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述二硫键还原剂为三(2-羧乙基)膦。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述外切酶ExoIII的用量为6UμL^-1。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中HP-AuNPs@SiO₂、外切酶ExoⅢ和microRNA-155的孵育的温度为37℃。

10.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，CdSeTe/ZnS量子点、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的孵育温度为37℃。