[发明专利]一种基于量子点构建的网状结构检测microRNA-155的方法

说明书

本发明提出一种基于量子点构建的网状结构检测microRNA‑155的方法，在microRNA‑155存在下，固定在金纳米粒子@SiO₂核壳纳米复合物(AuNPs@SiO₂)表面的发夹探针可以部分与之杂交。然后，利用外切酶ExoIII可以产生大量的H1‑AuNPs@SiO₂。将辅助链A2、H1‑AuNPs@SiO₂与A1‑QDs结合，然后用AuNPs@SiO₂通过FRET作用猝灭量子点的荧光信号。溶液中含有越多的microRNA‑155，相应的FL信号就越弱。该方法线性响应范围为0.01fM‑1nM，最低检出限为3aM。此外，该方法在实际人血清样品中的特异性较高，回收率在93‑107％之间，具有很大的实际应用前景。

技术领域

本发明属于纳米生物传感器以及荧光检测分析技术领域，具体涉及一种基于核壳CdSeTe/ZnS量子点构建的网状结构检测microRNA-155的方法。

背景技术

到目前为止，许多癌症和肿瘤还不能完全治愈，例如肺癌，其发病率和死亡率几乎最高，对我们的健康构成了严重的威胁。因此，早期及时治疗对于挽救患者生命是非常必要的。目前迫切需要开发更有效的肺癌早期诊断方法。miRNA是一类内源性非编码短单链调控RNA，调节靶蛋白和信号通路，参与细胞发育、分裂增殖甚至细胞分化等生物学过程。microRNA-155显示了在患者血浆中的特异性表达水平，因此被选为肿瘤标记物并进行了研究。然而，由于microRNA-155的含量极低，给科学家对它的定性定量检测带来了巨大的挑战。荧光分析具有操作简单，不需要任何复杂仪器，灵敏度高和成本低等优点，常被应用于构建荧光生物传感器检测miRNA。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测miRNA的方法，该方法可以对microRNA-155进行定性、定量检测，具有操作简单、准确性高、检测范围广、灵敏度高、特异性强等优点。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

一种基于量子点构建的网状结构检测microRNA-155的方法，包括如下步骤：

(1)制备核酸序列修饰的量子点：

将核壳结构的CdSeTe/ZnS量子点表面的羧基活化后置于核酸序列A1的溶液中，孵育15～20h，得到核酸序列A1修饰的量子点，标记为A1-QDs；

所述核酸序列A1为：5’-GTTGCCATTGAC-NH₂-3’；

(2)制备核酸序列修饰的AuNPs@SiO₂复合材料：

将断裂二硫键后的核酸序列HP的溶液加入AuNPs@SiO₂的分散液中，于35～38℃的黑暗中孵育15～24h，之后采用巯基己醇阻断AuNPs@SiO₂上剩余的活性结合位点，得到核酸序列HP修饰的AuNPs@SiO₂复合材料，标记为HP-AuNPs@SiO₂；

所述核酸序列HP为：

5’-SH-ACCTCACACTGTTAATGACCCCTATCACGATTAGCATTAA-3’；

(3)对microRNA-155进行荧光检测：

将步骤(2)制备得到的HP-AuNPs@SiO₂、外切酶ExoⅢ和microRNA-155于30～40℃中孵育1～2h之后离心、净化得到的沉淀标记为H1-AuNPs@SiO₂；

向H1-AuNPs@SiO₂中加入步骤(1)制备得到的A1-QDs和核酸序列A2，于37℃中孵育1～2h，然后记录溶液的荧光强度；