[发明专利]乳糖代谢相关基因突变位点的检测方法在审
申请号: | 201910335833.6 | 申请日: | 2019-04-24 |
公开(公告)号: | CN109880901A | 公开(公告)日: | 2019-06-14 |
发明(设计)人: | 张立波;张宇 | 申请(专利权)人: | 杭州云鼎基因生物科技有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6883 | 分类号: | C12Q1/6883;C12Q1/686;C12N15/11 |
代理公司: | 成都顶峰专利事务所(普通合伙) 51224 | 代理人: | 刘林 |
地址: | 310000 浙江省杭州市滨江区长*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 目标片段 乳糖代谢 突变位点 单碱基延伸技术 检测 基因位点 双向延伸 相关基因 单碱基延伸引物 特异性引物组 多重PCR扩增 目标DNA序列 单碱基延伸 安全指导 变异位点 测定目标 临床用药 质谱分析 目标位 再利用 单管 核酸 组对 | ||
本发明属于乳糖代谢技术领域,为了解决单向单碱基延伸难以对变异位点进行精确确定的问题;公开了一种乳糖代谢相关基因突变位点的检测方法,通过设计的目标位点特异性引物组的单管多重PCR扩增反应得到目标片段,然后再利用单碱基延伸技术对所述目标片段进行双向延伸,得到等待检测基因位点,最后通过核酸质谱分析等待检测基因位点精确测定目标DNA序列;其中,所述单碱基延伸技术是采用单碱基延伸引物组对所述目标片段进行双向延伸;对目标DNA序列中的突变位点能够进行精确定位,为个人临床用药提供安全指导的作用。
技术领域
本发明涉及乳糖代谢技术领域,特别涉及一种乳糖代谢相关基因突变位点的检测方法。
背景技术
基因组学研究表明,乳糖在体内的吸收效果与MCM6基因的表型密切相关。MCM6基因的扩增片段分别为MCM6-1和MCM6-2;
因此,检测相关基因的变异情况,能有效帮助人们合理饮食,保证营养平衡。
目前市场上的相关核酸质谱检测技术均是采用单向单碱基延伸技术来进行的。而单向单碱基延伸难以对变异位点进行精确确定。
本发明旨在通过双向单碱基延伸的技术,对乳糖代谢相关基因进行变异检查,从而为个体临床用药提供安全指导。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足,提供一种乳糖代谢相关基因突变位点的检测方法和检测试剂盒。
本发明采用的技术方案是:一种乳糖代谢相关基因突变位点的检测方法,通过设计的目标位点特异性引物组的单管多重PCR扩增反应得到目标片段,然后再利用单碱基延伸技术对所述目标片段进行双向延伸,得到等待检测基因位点,最后通过核酸质谱分析等待检测基因位点精确测定目标DNA序列;
其中,所述单碱基延伸技术是采用单碱基延伸引物组对所述目标片段进行双向延伸。
优选地,所述目标位点特异性引物组包括:
用于扩增乳糖代谢相关基因MCM6-1片段的特异性引物,该特异性引物的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示,特异性引物的反向引物的核苷酸序列如为SEQ ID No.2所示;
用于扩增乳糖代谢相关基因MCM6-2片段的特异性引物,该特异性引物的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示,特异性引物的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。
优选地,所述单碱基延伸引物组包括:
用于扩增乳糖代谢相关基因MCM6-1片段的单碱基延伸引物,该单碱基延伸引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示;
用于扩增乳糖代谢相关基因MCM6-2片段的单碱基延伸引物,该单碱基延伸引物的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。
优选地,所述单管多重PCR扩增的反应程序为:95℃2分钟,95℃30秒,56℃20秒,72℃60秒,45循环,72℃5分钟,4℃保存。
本发明的有益效果是:
通过设计的目标位点特异性引物的单管多重PCR扩增反应得到目标片段,然后再利用单碱基延伸技术,通过双向延伸,得到等待检测基因位点,最后通过核酸质谱分析精确测定目标DNA序列;对目标DNA序列中的突变位点能够进行精确定位,为个人临床用药提供安全指导的作用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明,以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解,本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
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