[发明专利]一种以黄梁木嫩芽为外植体的高效组培扩繁方法

权利要求书

1.一种以黄梁木嫩芽为外植体的高效组培扩繁方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)外植体消毒进瓶：选取黄梁木嫩芽，清洗，采用消毒剂灭菌处理1～5分钟，清洗，剥除芽鳞后放入MS基本培养基培养1～3天；

(2)愈伤组织诱导：将步骤(1)中培养1～3天后的芽采用消毒剂灭菌1～5分钟，清洗，然后切下芽上的叶片，横向切出1～3个切口，转接入愈伤组织诱导培养基，暗培养1～3天，转移至光照强度为1500～2000lx、温度为25～28℃的条件下每天光照培养10～15小时，每隔一个月更换新培养基，直至形成出现芽点的愈伤组织；

(3)不定芽诱导：将步骤(2)中获得的出现芽点的愈伤组织转接入芽诱导培养基中，在光照强度为1500～2000lx、温度为25～28℃的条件下每天光照培养10～15小时，每隔一个月更换新培养基，直至形成不定芽；

(4)继代培养：将步骤(3)中获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于光照强度为2000～2500lx、温度为25～28℃的条件下每天光照培养12～15小时，至形成2～4cm不定芽；

(5)生根培养：将步骤(4)中获得的2～4cm的不定芽切下并接种到生根培养基上进行生根诱导，25～28℃条件下暗培养3～5天，然后置于光照强度为2000～2500lx、温度为25～28℃的条件下每天培养光照12～15小时，至长出5～8cm的生根试管苗；

步骤(1)中所述的MS基本培养基为：MS+25g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，pH为5.5；

步骤(2)中所述的愈伤组织诱导培养基为：MS+3.0mg/L TDZ+0.1mg/L 2,4-D+0.05mg/LNAA+25g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8；

步骤(3)中所述的芽诱导培养基为：MS+1.5mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+25g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8；

步骤(4)中所述的增殖培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+25g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8；

步骤(5)中所述的生根培养基为：MS+0.05mg/L NAA+25g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

2.根据权利要求1所述的以黄梁木嫩芽为外植体的高效组培扩繁方法，其特征在于：步骤(1)中所述的黄梁木嫩芽为野外黄梁木嫩芽。

3.根据权利要求1或2所述的以黄梁木嫩芽为外植体的高效组培扩繁方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的培养的时间为2天；

步骤(2)中所述的暗培养的时间为2天；

步骤(2)和(3)中所述的光照培养的时间为12小时；

步骤(4)中所述的光照强度为2500lx；

步骤(5)中所述的光照强度为2500lx。

4.根据权利要求1或2所述的以黄梁木嫩芽为外植体的高效组培扩繁方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的灭菌处理的时间为3分钟；

步骤(1)和(2)中所述的消毒剂为氯化汞+吐温-20；

步骤(1)和(2)中所述的清洗的次数为3次，每次2分钟；

步骤(1)和(2)中所述的灭菌和清洗的过程中将容器震荡摇匀；

步骤(2)中所述的清洗采用无菌水；

步骤(2)中所述的灭菌处理的时间为2分钟。

5.根据权利要求1所述的以黄梁木嫩芽为外植体的高效组培扩繁方法，其特征在于还包括如下步骤：

(6)炼苗移栽：将步骤(5)中获得的5～8cm的生根试管苗在光照下炼苗3～5天，洗净根部培养基，栽入泥炭土基质中并定植于盆中。