[发明专利]一种以黄梁木嫩芽为外植体的高效组培扩繁方法

说明书

本发明公开了一种以黄梁木嫩芽为外植体的高效组培扩繁方法。本发明是以黄梁木嫩芽为外植体，通过消毒进瓶、愈伤组织诱导、不定芽诱导、继代培养、生根培养和炼苗移栽等过程成功获得黄梁木离体再生植株，建立了黄梁木高效再生体系。本发明所提供的黄梁木高效组培扩繁方法不仅具有简单易行、经济的特点，而且能够保存黄梁木的优良性状，育成的黄梁木组培苗移栽成活率达到98％以上，可以为黄梁木规模化种植提供优质种苗保障，对于进行野外黄梁木优良性状个体资源的保护、优良无性系快速繁殖、大面积推广、促进黄梁木的产业化发展具有重要意义。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，特别涉及一种以黄梁木嫩芽为外植体的高效组培扩繁方法。

背景技术

黄梁木(Neolamarckia cadamba)别名团花树，属茜草科团花属常绿阔叶乔木，在我国的华南地区广泛分布(Ouyang et al.,2013)，高可达35m，胸径可达1m。黄梁木树干通直圆满，10年左右成材，胸径可达40～50cm，衰退期晚，适合于培养大径级用材，5年以前为高生长期，年平均高生长量达3.0～3.5m，5～10年为直径生长旺期，年平均生长量达3～4cm(邓小梅等，2011)。由于黄梁木生长十分快速，在菲律宾被称颂为“宝石树”(Fox,1971)，并在1972年的世界林业大会上被称为“奇迹树”。黄梁木材质良好，其木材淡黄色，纹理通直，锯刨切削容易，顺纹刨面光滑，且干燥快，不易开裂变形，可制成家具、建材等，同时也是人造纤维、纤维板、胶合板等的理想工业原料。

目前，黄梁木种苗主要通过种子播种和无菌种子苗扩繁方式繁育，但存在性状分离、优良性状得不到保存的问题。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种以黄梁木嫩芽为外植体的高效组培扩繁方法。

本发明之目的通过下述技术方案实现：一种以黄梁木嫩芽为外植体的高效组培扩繁方法，包括如下步骤：

(1)外植体消毒进瓶：选取黄梁木嫩芽，清洗，采用消毒剂灭菌处理1～5分钟，清洗，剥除芽鳞后放入MS基本培养基培养1～3天；

(2)愈伤组织诱导：将步骤(1)中培养1～3后的芽采用消毒剂灭菌1～5分钟，清洗，然后切下芽上的叶片，横向切出1～3个切口，转接入愈伤组织诱导培养基，暗培养1～3天，转移至光照强度为1500～2000lx、温度为25～28℃的条件下每天光照培养10～15小时，每隔一个月更换新培养基，直至形成出现芽点的愈伤组织；

(3)不定芽诱导：将步骤(2)中获得的出现芽点的愈伤组织转接入芽诱导培养基中，在光照强度为1500～2000lx、温度为25～28℃的条件下每天光照培养10～15小时，每隔一个月更换新培养基，直至形成不定芽；

(4)继代培养：将步骤(3)中获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于光照强度为2000～2500lx、温度为25～28℃的条件下每天光照培养12～15小时，至形成2～4cm不定芽；

(5)生根培养：将步骤(4)中获得的2～4cm的不定芽切下并接种到生根培养基上进行生根诱导，25～28℃条件下暗培养3～5天，然后置于光照强度为2000～2500lx、温度为25～28℃的条件下每天培养光照12～15小时，至长出5～8cm的生根试管苗。

本发明还包括如下步骤：

(6)炼苗移栽：将步骤(5)中获得的5～8cm的生根试管苗在光照下炼苗3～5天，洗净根部培养基，栽入泥炭土基质中并定植于盆中。

步骤(1)中所述的黄梁木嫩芽为野外黄梁木嫩芽。

步骤(1)中所述的灭菌处理的时间优选为3分钟。

步骤(1)中所述的MS基本培养基为：MS+25g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，pH为5.5。