[发明专利]检测核酸片段长度的方法

说明书

一种检测核酸片段长度的方法，包括：将待检测核酸稀释至预定浓度；分别取等量体积的核酸与梯度倍数用量的磁珠结合；通过磁力装置吸附结合了核酸的磁珠，并去除上清；使用等量体积的洗脱缓冲液回溶磁珠上结合的核酸，并检测回溶核酸浓度；计算核酸与磁珠结合前后的浓度差异，并形成浓度差异与磁珠梯度倍数用量之间的曲线关系；将曲线关系与标准品曲线进行比对得到待检测核酸的片段长度，其中标准品曲线包括预定浓度的不同片段长度的核酸标准品与梯度倍数用量的磁珠结合前后的浓度差异与磁珠梯度倍数用量之间的对应关系。本发明的方法基于同种磁珠不同浓度倍数对核酸片段偏向性筛选的特性，结合数据分析对核酸片段的长度进行简易高效的检测。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种检测核酸片段长度的方法。

背景技术

一直以来，核酸片段长度都是采用核酸电泳的方法检测，其原理基本是：带电荷的物质(核酸)在电场中的趋向运动称为电泳。核酸电泳是进行核酸研究的重要手段，是核酸探针、核酸扩增和序列分析等技术所不可或缺的组成部分。核酸电泳通常在琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶中进行，浓度不同的琼脂糖和聚丙烯酰胺可形成分子筛网孔大小不同的凝胶，可用于分离不同分子量的核酸片段。

琼脂糖是从海藻中提取出来的一种线状高聚物。将琼脂糖在所需缓冲液中加热熔化成清澈、透明的溶胶，然后倒入胶模中，凝固后将形成一种固体基质，其密度取决于琼脂糖的浓度。将凝胶置于电场中，在中性pH值下带电荷的核酸通过凝胶网孔向阳极迁移，迁移速率受到核酸的分子大小、构象、琼脂糖浓度、所加电压、电场、电泳缓冲液、嵌入染料的量等因素影响。在不同条件下电泳适当时间后，大小、构象不同的核酸片段将处在凝胶不同位置上，从而达到分离的目的。琼脂糖凝胶的分离范围较广，用各种浓度的琼脂糖凝胶可分离、纯化200bp-50kb长度的核酸片段，广泛应用于基因组提取与分析、载体构建、质粒提取等方面，分辨率较低，相差100bp以内的核酸片段较难分离。

聚丙烯酰胺凝胶通过丙烯酰胺单体、链聚合催化剂N，N，N’，N’-四甲基乙二胺(TEMED)和过硫酸铵以及交联剂N，N’-亚甲双丙烯酰胺之间的化学反应而形成。丙烯酰胺单体在催化剂作用下产生聚合反应形成长链，长链经交联剂作用交叉连接形成凝胶，其孔径由链长和交联度决定。链长取决于丙烯酰胺的浓度，调节丙烯酰胺和交联剂的浓度比例，可改变聚合物的交联度。聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据电泳样品的电荷、分子大小及形状的差别达到分离目的，兼具分子筛和静电效应，分辨力高于琼脂糖凝胶电泳，可分离只相差1个核苷酸的DNA片段。聚丙烯酰胺凝胶电泳用于分析和制备长度小于1kb的DNA片段。根据所要分离的核酸片段大小，可制备不同浓度的凝胶，适用于序列分析与比对、核酶分析与鉴定、小片段核酸的提取与分析等方面，可以精确分离相差十几至几十个核苷酸的小片段核酸分子。

一般来讲，对于核酸片段长度的查看都是电泳后通过使用溴化乙锭(ethidiumbromide，EB)作为荧光染料，它可以嵌入核酸双链的配对碱基之间，在电泳过程中随核酸片段迁移，将凝胶置紫外光下，插入核酸链中的EB在紫外线激发下产生红色荧光，可清楚显示各核酸片段的迁移。

但由于EB见光易分解，应存棕色试剂瓶中于4℃下保存。且由于EB是一种强的诱变剂并有中度毒性，对实验及环境的污染较大，使用时必须戴手套操作，所以使用需要特别小心。在实际操作中使用的过程对人工消耗极大且不容易大规模操作，不符合自动化使用的批量检测的要求，不能成套地进行处理，且相对成本较高。

现有技术中还有通过微芯片-电泳芯片检测核酸片段长度的方法，其缺点在于，相对成本较高，且对于大规模的样本片段长度检测能力不足。

发明内容

本发明提供一种检测核酸片段长度的方法，该方法基于同种磁珠不同浓度倍数对核酸片段偏向性筛选的特性，结合数据分析对核酸片段的长度进行简易高效的检测。

本发明的检测核酸片段长度的方法，通过如下技术方案实现：

一种检测核酸片段长度的方法，包括：