[发明专利]一种识别来自两个体的混合精斑的方法

权利要求书

1.一种识别来自两个体的混合精斑的方法，其特征在于，所述的方法应用精子细胞表面含有与个体ABO血型相对应的ABH抗原进行分离识别个体。

2.一种识别来自两个体的混合精斑的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1、制备ABH抗原差异的两个体混合精斑；

步骤2、使用标记的抗A、抗B和抗H抗体进行免疫组织化学染色，并利用细胞捕获技术分别收集不同ABH血型的精子细胞；

步骤3、进行PCR扩增和毛细管电泳以对STR基因座进行基因分型。

3.根据权利要求2所述的识别来自两个体的混合精斑的方法，其特征在于， 所述的步骤1具体操作如下：将两男性个体来源的精液与女性阴道液混合在一起，通过差异提取法消化混合的精斑，去除女性成分，洗涤并悬浮在0.9％NaCl中至密度为10×10⁶ / ml。

4.根据权利要求2所述的识别来自两个体的混合精斑的方法，其特征在于， 所述的步骤2具体操作如下：

1）将20μl精子悬浮液涂抹并在热风扇下吹20分钟；

2）将混合精斑置于100％甲醇溶液中30分钟，并用pH7.2磷酸盐缓冲盐水洗涤2次，每次10分钟；

3）使用含有3％BSA的0.1％ 的Triton X-100 PBS将混合精斑置于室温加湿箱中密封1小时；

4）将混合精斑放在用三种荧光颜色标记的抗A、抗B和抗H抗体中孵育，在4℃下染色过夜；使用不含抗体的PBS作为阴性对照；

5) 使用激光显微切割系统捕获抗A、抗B或仅抗H的阳性精子，在400×放大倍数下，使用355nm激光器切割并收集细胞。

5.根据权利要求2所述的识别来自两个体的混合精斑的方法，其特征在于， 所述的步骤3具体操作如下：

1）使用Chelex-100法提取精子基因组DNA，使用常染色体STR试剂盒，通过PCR扩增15个常染色体STR基因座；

2）将1微升每种PCR产物在10μL上样缓冲液中变性，所述上样缓冲液由HI-DI^TM甲酰胺和Internal Lane Standard 600标准品以体积比500：1的比例组成；

3）使用10秒注射时间和3.0KV注射电压在Applied Biosystems ^TM 3130xl SeriesGenetic Analyzer TM上进行分离和检测，使用GeneMapper ID v3.2软件分析原始数据。