[发明专利]一种识别来自两个体的混合精斑的方法

说明书

本发明属于法医学技术领域，具体涉及一种识别来自两个体的混合精斑的方法。本发明公开的方法应用精子细胞表面含有与个体ABO血型相对应的ABH抗原进行分离识别个体。具体包括如下步骤：步骤1、制备ABH抗原差异的两个体混合精斑；步骤2、使用标记的抗A、抗B和抗H抗体进行免疫组织化学染色，并利用细胞捕获技术分别收集不同ABH血型的精子细胞；步骤3、进行PCR扩增和毛细管电泳以对STR基因座进行基因分型。识别来自两个体的混合精斑的方法能有效从基因水平确定多个个体混合精斑中DNA的个体来源的推断，大大简化了鉴定刑侦现场体液或其斑迹的组织来源的步骤，能为明确案件性质、确定犯罪嫌疑人、以及定罪量刑等提供准确的科学依据。

技术领域

本发明属于法医学技术领域，具体涉及一种识别来自两个体的混合精斑的方法。

背景技术

强奸案中的女性阴道或内裤、床单上遗留的精斑是最常见的混合检材，经过消化女性成分，可得到单一的男性分型。但是在一些轮奸案中，往往是多个男性个体的精液混在一起，并且含有大量女性上皮细胞。目前现有技术中可采用1）单纯Y染色体识别法，即由于Y染色体的父系遗传，属于同一父系家族的男性具有相同的Y染色体STR类型。在这种情况下，STR结果可以排除无关个体，但不能达到个人识别的目的。2）差异裂解法，这种方法对于无污染且含有较多精子的混合斑效果较好，但对于现场污染严重的疑难混合斑的提取效果不理想；而且由于检材易受现场中土壤、灰尘、色素等抑制物的干扰，使扩增效率下降或扩增失败，因而分型效果较差。3）激光捕获显微切割技术，该方法需要在显微镜下寻找完整精子细胞并切割富集，由于获取的精子数目限制，有时候不能满足PCR检测灵敏度的数量要求。此外，在一些陈旧或者降解检材中，往往精子细胞的尾部会断裂丢失，显微镜下难以辨认典型精子细胞，操作困难。4）采用常规分析方法对男性物质进行分离检验非常困难，有时即使得到了分型结果，也往往表现为各混合组份的分型相互并存，或女性成分呈优势扩增的现象，使结果的分析变得很复杂。因此，研制开发一种可快速准确的识别来自两个体的混合精斑的方法一直是亟待解决的新课题。

发明内容

精子细胞表面含有与个体ABO血型相对应的ABH抗原，精子中ABH抗原的表达受ABH基因的控制，与个体的分泌状态无关，这是本发明研究的基础。本技术采用免疫荧光染色检测精子细胞表面的ABO血型抗原。根据精子细胞中ABH抗原的不同，利用激光显微切割捕获同一类型的精子细胞，随后进行DNA 提取和PCR 扩增，毛细管凝胶电泳检测15个常染色体STR基因位点，得到精子细胞的STR位点基因分型。鉴于现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种识别来自两个体的混合精斑的方法。该方法分离速度快、效率高；操作简单、不需要昂贵的仪器设备；不影响被分离细胞的生物学性状和功能。能有效从基因水平确定多个个体混合精斑中DNA的个体来源的推断，大大简化了鉴定刑侦现场体液或其斑迹的组织来源的步骤，能为明确案件性质、确定犯罪嫌疑人、以及定罪量刑等提供准确的科学依据。

为实现为实现上述目的，本发明采用以下技术方案。

一种识别来自两个体的混合精斑的方法，应用精子细胞表面含有与个体ABO血型相对应的ABH抗原进行分离识别个体。

一种识别来自两个体的混合精斑的方法，包括如下步骤。

步骤1、制备ABH抗原差异的两个体混合精斑。

步骤2、使用标记的抗A、抗B和抗H抗体进行免疫组织化学染色，并利用细胞捕获技术分别收集不同ABH血型的精子细胞。

步骤3、进行PCR扩增和毛细管电泳以对STR基因座进行基因分型。

进一步地，一种识别来自两个体的混合精斑的方法，具体包括如下步骤。

步骤1、制备ABH抗原差异的两个体混合精斑。