[发明专利]一种蔗糖-葡萄糖-果糖含量测定试剂盒及其测定方法

权利要求书

1.一种蔗糖-葡萄糖-果糖含量测定试剂盒及其测定方法，包括试剂盒体(1)、试剂管(2)、活动连接装置(3)、密封盖(4)和锁定装置(5)，其特征在于：所述试剂盒体(1)的内部固定安装有试剂管(2)，所述试剂盒体(1)的右侧固定安装有活动连接装置(3)，所述活动连接装置(3)的右端固定安装有密封盖(4)，所述密封盖(4)的右端表面及试剂盒体(1)的表面固定安装有锁定装置(5)；

所述锁定装置(5)包括限位块(501)、固定杆(502)、锁定块(503)、活动卡杆(504)和复位弹簧(505)，所述密封盖(4)的右端固定安装有限位块(501)，所述限位块(501)的内部活动连接有固定杆(502)，所述试剂盒体(1)的左侧固定安装有锁定块(503)，所述锁定块(503)的内部活动连接有活动卡杆(504)，所述活动卡杆(504)相对的一侧均固定安装有复位弹簧(505)。

2.根据权利要求1所述的一种蔗糖-葡萄糖-果糖含量测定试剂盒，其特征在于：所述活动连接装置(3)包括圆杆固定块、圆杆以及旋转块，试剂盒体(1)的右侧固定安装有圆杆固定块，圆杆固定块相对的一侧固定安装有圆杆，圆杆的表面活动连接有旋转块。

3.根据权利要求1所述的一种蔗糖-葡萄糖-果糖含量测定试剂盒，其特征在于：所述锁定块(503)的内部固定安装有销钉，活动卡杆(504)通过销钉与锁定块(503)活动连接。

4.根据权利要求1所述的一种蔗糖-葡萄糖-果糖含量测定试剂盒，其特征在于：所述锁定块(503)的内部固定安装有弹簧固定块，且复位弹簧(505)固定安装在弹簧固定板的两侧。

5.一种蔗糖-葡萄糖-果糖含量测定方法，其特征在于：包括以下步骤：

一、样本制备：取约0.2g样本，加1mL的蒸馏水研磨，粗提液全部转移到EP管中，12000rpm，常温离心10min，上清液待测。

二、检测步骤：

1)、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。

2)、取四个1mL石英比色皿：蔗糖测定管：依次加入25μL样本，25μL蔗糖酶(10U)，25μLNADP⁺(5mM)和600μL磷酸缓冲液；蔗糖对照管：依次加入25μL蔗糖酶(10U)，25μL NADP⁺(5mM)和625μL磷酸缓冲液；果糖和葡萄糖测定管：依次加入25μL样本，25μL NADP⁺和600μL磷酸缓冲液；果糖和葡萄糖对照管：25μL NADP⁺和625μL磷酸缓冲液；上述四管依次加完试剂混匀后，静置2min后于340nm处读取各管的A1值。

3)、向上述四个操作管中分别加入25μL己糖激酶和G6P的酶混合物(10U)，混匀，反应15min于340nm处读取各管的A2值(若A值继续增加，需延长反应时间，直至2分钟内的吸光值保持不变)。

4)、向果糖和葡萄糖测定管和对照管中分别加入25μL磷酸果糖异构酶(20U)。混匀，反应15min于340nm处读取各管的A3值(若A值继续增加，需延长反应时间，直至2分钟内的吸光值保持不变)。

三：结果计算：

ΔA葡萄糖＝(A2-A1)测定管N-(A2-A1)对照管N；

ΔA果糖＝(A3-A2)测定管N-(A3-A2)对照管N；

ΔA蔗糖＝[(A2-A1)测定管M-(A2-A1)对照管M]-ΔA葡萄糖；

1)、按样本质量计算：

葡萄糖含量(mg/g鲜重)＝[ΔA葡萄糖÷(ε×d)]×V2×103×180.16÷(V1÷V×W)＝0.8×ΔA葡萄糖÷W×D

果糖含量(mg/g鲜重)＝[ΔA果糖÷(ε×d)]×V2×103×180.16÷(V1÷V×W)＝0.8×ΔA果糖÷W×D

蔗糖含量(mg/g鲜重)＝[ΔA蔗糖÷(ε×d)]×V2×103×342.3÷(V1÷V×W)＝1.52×ΔA蔗糖÷W×D

ε---NADPH的摩尔吸光系数为6.3×103L/mol/cm；d---光径距离，1cm；

V---提取液体积，1mL；V1---样本体积，25μL＝0.025mL；

V2---反应总体积，700μL＝7×10^-4L；葡萄糖分子量---180.16；

果糖分子量---180.16；蔗糖分子量---342.3；

W---样本质量，g；D---稀释倍数。