[发明专利]一种新的测定核糖体失活蛋白的酶活性的方法

权利要求书

1.一种测定核糖体失活蛋白活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)核糖体失活蛋白与三磷酸腺苷和Triton X-100混合，于53~62℃和pH 1~3的条件下反应；所述核糖体失活蛋白为MAP30；

(2)步骤(1)的产物与偶联酶试剂混合，发生酶促反应和显色反应，反应温度为37℃，反应时间为20min，反应pH为6.5~7.0；

(3)测定550nm处的光吸收值；

所述偶联酶试剂含有催化量的腺苷脱氨酶、过氧化物酶和黄嘌呤氧化酶，以及足够量转化(2)中酶促反应产生的所有过氧化氢的4-氨基安替比林和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐；

步骤(1)的反应时间为30min~60min。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中反应温度为55~58℃。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述偶联酶试剂中含有：

40mM的N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐、5g/L的4-氨基安替比林、9U/mL的过氧化物酶、6U/mL的腺苷脱氨酶、6U/mL的黄嘌呤氧化酶。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，它还包括：

使用步骤(3)所测得光吸收值来直接表示核糖体失活蛋白的相对活性大小。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，它还包括：

以活性单位表示核糖体失活蛋白的活性；

所述活性单位定义是：在给定的条件下，每分钟产生1μmol的过氧化氢为1个活性单位；

公式中，C_A mmol/L，腺嘌呤浓度；V_tmL，反应总体积；V_s1 mL，RIP体积；V_s2 mL，从V_t中取出的反应液体积；t min，底物与酶的反应时间；10³ μmol；d_f，RIP稀释倍数。