[发明专利]一种同时测定血浆中氨基糖苷类抗生素药物浓度的HPLC-MS/MS方法

权利要求书

1.一种同时测定血浆中氨基糖苷类抗生素药物浓度的HPLC-MS/MS方法，其特征在于，所述方法为高效液相色谱联合质谱法，包括以下步骤：

(1)储备液的制备：用体积分数为40％-60％甲醇水溶液作为溶剂，配制得到氨基糖苷类抗生素药物储备液和内标达比加群储备液；

(2)标准曲线血浆样本的制备：取空白血浆，将步骤(1)制备的氨基糖苷类抗生素药物储备液和内标达比加群储备液分别加入到空白血浆中，得到标准曲线血浆样本；

(3)标准曲线的设计：取步骤(2)得到的标准曲线血浆样本于试管中，涡旋振荡后加入a溶液沉淀、振荡离心，所述a溶液是按照甲酸体积：甲醇体积＝0.01％-0.2％配制，然后取上清液在高效液相色谱质谱联用仪上进样分析，记录标准曲线血浆样本的色谱图，计算药物峰面积和内标峰面积的比值，以药物浓度为横坐标，以药物峰面积和内标峰面积比值为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归运算，求得回归方程即为标准曲线；

(4)质控血浆样本的制备：取待测血浆样本，将步骤(1)得到的氨基糖苷类抗生素药物储备液和内标达比加群储备液分别加入到待测血浆样本中，得到质控血浆样本；

(5)待测血浆样本中药物浓度的测定：取步骤(4)得到的质控血浆样本于试管中，涡旋振荡后加入a溶液沉淀、振荡离心，所述a溶液是按照甲酸体积：甲醇体积＝0.01％-0.2％配制，然后取上清液在高效液相色谱质谱联用仪上进样分析，记录质控血浆样本的色谱图，计算药物峰面积和内标峰面积的比值；

(6)质控血浆样本中氨基糖苷类抗生素药物浓度的计算：根据步骤(3)得到的标准曲线来计算得到质控血浆样本中氨基糖苷类抗生素药物浓度；

所述氨基糖苷类抗生素药物为阿米卡星、异帕米星、庆大霉素；

液相色谱参数为：

色谱柱：Waters X Bridge HILIC柱：4.6×50mm，3.5μm；

流动相：流动相A和流动相B，流动相梯度洗脱条件为：0-1.00min，流动相A的体积分数为90％；1.00-1.10min，流动相A的体积分数为90％-10％；1.10-4.00min，流动相A的体积分数为10％；4.00-4.10min，流动相A的体积分数为10％-90％；4.10-5.00min，流动相A的体积分数为90％，流速为0.3mL/min，进样量10uL，其中，流动相A为体积分数为0.1％的甲酸水溶液，流动相B为100％乙腈；

质谱条件：采用电喷雾离子源，正离子检测，选择多反应监测工作方式进行一/二级质谱分析，质谱检测工作参数如下：阿米卡星的母离子/特征子离子的检测离子对为586/425、异帕米星的母离子/特征子离子的检测离子对为570/411、庆大霉素的母离子/特征子离子的检测离子对为478/322、内标达比加群的母离子/特征子离子的检测离子对为472/289；阿米卡星的锥孔电压为22V、碰撞能量为21eV，异帕米星的锥孔电压为30V、碰撞能量为22eV，庆大霉素的锥孔电压为30V、碰撞能量为21eV，内标达比加群的锥孔电压为30V、碰撞能量为25eV；雾化气为氮气，雾化器流速为70L/hr；干燥气为氮气，干燥气温度为350℃，干燥气流速为700L/hr。

2.根据权利要求1所述同时测定血浆中氨基糖苷类抗生素药物浓度的HPLC-MS/MS方法，其特征在于，所述振荡离心的条件为：4℃、13000rad/min。

3.根据权利要求1所述同时测定血浆中氨基糖苷类抗生素药物浓度的HPLC-MS/MS方法，其特征在于，标准曲线血浆样本中各药物浓度范围为：异帕米星0.66-20.52μg/mL；阿米卡星0.65-20.02μg/mL；庆大霉素0.75-23.00μg/mL；

标准曲线血浆样本中内标达比加群浓度为1μg/mL。

4.根据权利要求1所述同时测定血浆中氨基糖苷类抗生素药物浓度的HPLC-MS/MS方法，其特征在于，所述步骤(1)中甲醇水溶液的体积分数为50％。

5.根据权利要求1所述同时测定血浆中氨基糖苷类抗生素药物浓度的HPLC-MS/MS方法，其特征在于，所述a溶液是按照甲酸体积：甲醇体积＝0.1％的方法配制。