[发明专利]一种同时测定血浆中氨基糖苷类抗生素药物浓度的HPLC-MS/MS方法

说明书

本发明公开了一种同时测定血浆中三种氨基糖苷类抗生素浓度的HPLC‑MS/MS方法：以达比加群为内标，先用含甲酸体积分数为0.1％的甲醇溶液对血浆中的蛋白进行沉淀，再使用高效液相色谱法分离上清液中的药物成分，然后使用高分辨质谱多反应监测模式进行药物靶向性检测，并进行定量，实现同时对血浆中三种氨基糖苷类抗生素浓度分析测定。其优点表现在：本方法在具有快捷性的同时，兼具极高的靶向性，表现出快速、通量高、灵敏度高、特异性强、精密度和准确度良好、稳定性好、提取回收率高、无明显基质效应和稀释效应等优点。本发明方法可用于临床上常用的氨基糖苷类抗生素的血药浓度监测，指导氨基糖苷类抗生素的合理临床应用。

技术领域

本发明涉及临床血药浓度监测控制技术领域，具体地说，是一种同时测定血浆中氨基糖苷类抗生素药物浓度的HPLC-MS/MS方法。

背景技术

氨基糖苷类抗生素(Aminoglyeosides)，如阿米卡星、异帕米星、庆大霉素是一种由氨基糖与氨基环醇通过氧桥连接而成的苷类抗生素药物。氨基糖苷类抗生素抗菌谱广，杀菌活性强，抗生素后效应明显，因此在治疗严重的院内感染中具有相当重要的价值。然而这些抗生素主要从肾脏排泄，并有耳肾毒性，药物疗效、毒性均与血药浓度浓度相关、氨基糖苷类抗生素的优势与毒性作用都极为突出，为了保证达到有效的治疗浓度和避免不良反应，临床医生需要常监测血药浓度，结合病人病情等进行个体化给药剂量的调整，提高该类药物疗效，减少毒副反应的发生。因而，准确、灵敏的定量分析方法测定该些抗生素在血清(血浆)中的药物浓度很有必要。

现有技术中氨基糖苷类抗生素的定量方法主要有微生物法、免疫分析法、高效液相色谱法。虽然测定的方法众多，但存在测定的成本较高或者效果不理想，不能满足临床上的要求的缺陷。此外，这些方法检测标准不统一。因此，迫切需要建立一种能够同时测定上述药物的方法，这样就不必针对不同药物的检测需求来开发不同的方法，可以大幅降低后续开发成本，也有利于检测标准的统一，从而为不同检测点或实验室采集的数据能够相互参考或使用提供可能性。

中国专利申请：CN106053638B公开了一种动物源食品中氨基糖苷类抗生素残留量的检测方法，具体涉及一种基于HILIC色谱柱串联三重四级杆质谱，检测动物源食品中氨基糖苷类抗生素残留量的检测方法。其特征在于：样品经过提取、固相萃取、经ZIC-HILIC色谱柱分离后，由三重四级杆质谱测定。但该专利存与本专利检测的方法、涉及的质谱参数等条件不同，且该专利的检测下限较大。

针对上述缺陷发明人设计了本专利一种同时测定血浆中氨基糖苷类抗生素药物浓度的方法：以达比加群为内标，用含甲酸的甲醇溶液对血浆中的蛋白进行沉淀，再使用高效液相色谱分离上清液中的药物成分，然后使用高分辨质谱多反应监测模式进行药物靶向性检测，并进行定量，实现同时对血浆中三种氨基糖苷类抗生素浓度进行分析测定。本发明具有快捷性、极高的靶向性、通量高、灵敏度高、特异性强、精密度和准确度良好、稳定性好、提取回收率高、无明显基质效应和稀释效应等优点。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种同时检测血浆中三种氨基糖苷类抗生素浓度的LC-MS/MS检测方法，本方法检测时间短、灵敏度高、定量准确。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种同时检测血浆中三种氨基糖苷类抗生素浓度的LC-MS/MS检测方法，所述三种氨基糖苷类抗生素包括阿米卡星、异帕米星和庆大霉素，包括以下步骤：

(1)储备液的制备：用体积分数为40％-60％甲醇水溶液作为溶剂，分别配制得到一系列不同浓度的氨基糖苷类抗生素药物储备液和内标达比加群储备液；

(2)标准曲线血浆样本的制备：取空白血浆，将步骤(1)制备的不同浓度的氨基糖苷类抗生素药物储备液和内标达比加群储备液分别加入到空白血浆中，得到标准曲线血浆样本；