[发明专利]一种快速定性检测四大家鱼鱼肉制品的方法在审
| 申请号： | 201910343375.0 | 申请日： | 2019-04-26 |
| 公开（公告）号： | CN110066880A | 公开（公告）日： | 2019-07-30 |
| 发明（设计）人： | 张林;何力;甘金华;周剑光 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院长江水产研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 董路;王敏锋 |
| 地址： | 430223 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鲢鱼 鳙鱼 青鱼 定性检测 鱼肉样品 鱼肉制品 草鱼 生物信息学技术 基因克隆技术 多重PCR检测 特异性引物 长度判断 设计引物 鱼基因组 多重PCR 鱼鉴别 比对 条带 筛选 基因 | ||
1.一种快速定性检测四大家鱼鱼肉制品的方法，其特征在于包括如下步骤：
1.1、待测鱼肉样品中DNA的提取；
1.2、设计引物组合物：
所述的引物组合包括：
以青鱼D-LOOP基因为靶基因设计的一对引物：
上游引物D-LOOP-F：5’-TGTAGTAAGAGACCACCAACTGATT-3’，
下游引物D-LOOP-R：5’-CAACCTTGATTTTTATTTGAGCCTG-3’；
以草鱼COI基因为靶基因设计的一对引物：
上游引物COI-F：5’-TGGGAACCGCTCTAAGCCTTCTCAT-3’，
下游引物COI-R：5’-TAATAGTAGGAGGAAAGAAGGGGGT-3’；
以鲢鱼16SrRNA基因为靶基因设计的一对引物：
上游引物16SrRNA-F：5’-ATTTTTTTACCTGAGTATGGGAGAC-3，
下游引物16SrRNA-R：5’-TCACCAGGTTCGGTAGGTCTGTCAC-3’；
以鳙鱼12SrRNA基因为靶基因设计的一对引物：
上游引物12SrRNA-F：5’-TAGTTGATAAAACCACGGCGTAAAG-3，
下游引物12SrRNA-R：5’-TTGTCAGTGCTTTAGTGTTATGTAT-3’。
1.3、进行PCR扩增，将所得的PCR扩增产物用琼脂糖凝胶电泳进行检测，以无PCR扩增产物作为阴性对照；
1.4、根据特征条带的长度判断待测鱼肉样品的种类：
青鱼D-LOOP基因扩增片段在298bp处出现特异性条带，草鱼COI基因扩增片段在210bp处出现特异性条带，鲢鱼16SrRNA基因扩增片段在306bp处出现特异性条带，鳙鱼12SrRNA基因扩增片段在639bp处出现特异性条带。
2.根据权利要求1所述的快速定性检测四大家鱼鱼肉制品的方法，其特征在于：所述的PCR反应体系25.0μL，包括：
用ddH2O补足至25.0μL；
PCR反应条件：
95℃预变性3min；95℃预变性45s，55℃退火45s，72℃延伸45s，循环35次；72℃延伸8min。
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