[发明专利]一种快速定性检测四大家鱼鱼肉制品的方法

说明书

本发明公开了一种快速定性检测四大家鱼鱼肉制品的方法，包括如下步骤：1、待测鱼肉样品中DNA的提取；2、设计引物组合物：3、PCR扩增：4、根据特征条带的长度判断待测鱼肉样品的种类。本发明通过对已报到的四大家鱼基因组序列进行比对，筛选青鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼四大家鱼鉴别基因、设计了4对特异性引物，采用多重PCR方法，运用基因克隆技术和生物信息学技术，建立同时针对青鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼的准确、快速、高效的多重PCR检测方法。

技术领域

本发明属于水产品质量安全检测技术领域，具体涉及一种快速定性检测四大家鱼鱼肉制品的方法。

背景技术

我国是水产品生产大国，也是水产品加工、出口大国，水产品及其加工品在我国经济与对外贸易中均占有举足轻重的地位。随着国内国际贸易的增加，世界范围内水产品及其加工品消费量的增长，不同物种但无明显形态学特征的水产加工品之间价格的差异，往往导致掺杂使假等商业欺诈事件的发生，不仅损害了公平贸易，也给食品安全带来了挑战，因此建立方便快捷的水产品品种真伪鉴别方法势在必行。

鱼肉制品由于种类、营养及品质等方面的不同，导致其经济价值差异很大。据报道，近年来我国鱼肉制品的标签存在标识错误的问题或不法商贩为追求利润，以次充好，如油鱼冒充鳕鱼[1]，或掺入廉价鱼肉品种，一方面会影响产品的保藏，出现老化，劣化等现象，影响鱼糜制品生产企业的后续加工；另一方面，这种掺假行为严重扰乱了行业正常秩序，严重侵犯了消费者的知情权，严重损害了消费者的利益，并且存在一定的食品安全[2]。为了维护鱼肉制品尤其是鱼糜产业的健康发展，迫切需要建立鱼肉制品成分的快速检测方法。

四大家鱼(青鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼)鱼肉制品(鱼片、鱼丸、鱼糕、鱼排等)的消费量逐年增大，超市、餐厅随处可见。由于不能从外观等形态学方面来鉴定其品种，因此就有不法商家以低值品种的鱼假冒高值的鱼。而对于青鱼、草鱼、鲢、鳙4种鱼肉制品的快速检测方法还未有相关报道，因此急需针对四大家鱼鱼肉制品建立快速、准确、高效的鉴定方法。

发明内容

基于上述现有技术，本发明提供了一种快速定性检测四大家鱼鱼肉制品的方法，本发明通过对已报到的四大家鱼基因组序列进行比对，筛选青鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼四大家鱼鉴别基因、设计了4对特异性引物，采用多重PCR方法，运用基因克隆技术和生物信息学技术，建立同时针对青鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼的准确、快速、高效的多重PCR检测方法。

实现本发明上述目的所采用的技术方案为：

一种快速定性检测四大家鱼鱼肉制品的方法，包括如下步骤：

1、待测鱼肉样品中DNA的提取；

2、设计引物组合物：

所述的引物组合包括：

以青鱼D-LOOP基因为靶基因设计的一对引物：

上游引物D-LOOP-F：5’-TGTAGTAAGAGACCACCAACTGATT-3’，

下游引物D-LOOP-R：5’-CAACCTTGATTTTTATTTGAGCCTG-3’；

以草鱼COI基因为靶基因设计的一对引物：

上游引物COI-F：5’-TGGGAACCGCTCTAAGCCTTCTCAT-3’，

下游引物COI-R：5’-TAATAGTAGGAGGAAAGAAGGGGGT-3’；

以鲢鱼16SrRNA基因为靶基因设计的一对引物：

上游引物16SrRNA-F：5’-ATTTTTTTACCTGAGTATGGGAGAC-3，

下游引物16SrRNA-R：5’-TCACCAGGTTCGGTAGGTCTGTCAC-3’；