[发明专利]一种检测番茄主要病毒的多重PCR引物组及其应用

权利要求书

1.一种检测番茄主要病毒的多重RT-PCR引物组，其特征在于，所述的番茄主要病毒包括TMV、ChiVMV、PeVYV、ToCV和TZSV，所述引物组包括：

检测TMV的引物对，

其上游引物序列如SEQ ID No.1所示：5′-TGAGATTTCGCTGGCGTTTG-3′，

其下游引物序列如SEQ ID No.2所示：5′-TTCGCTGCTGTCATTGGGTC-3′；

检测ChiVMV的引物对，

其上游引物序列如SEQ ID No.3所示：5′-TGTGGCGTCCATTCGTCTGA-3′，

其下游引物序列如SEQ ID No.4所示：5′-ATGCCCAATCGGCGTAGTGA-3′；

检测PeVYV的引物对，

其上游引物序列如SEQ ID No.5所示：5′-GCGTTGCGGAATGGATGCTA-3′，

其下游引物序列如SEQ ID No.6所示：5′-GACCCTTTGGGCGAGGAGTG-3′；

检测ToCV的引物对，

其上游引物序列如SEQ ID No.7所示：5′-TGTCGCAGCCAATCACTACCT-3′，

其下游引物序列如SEQ ID No.8所示：5′-TCCTTTCTTTCTCGCCAACC-3′；

检测TZSV的引物对，

其上游引物序列如SEQ ID No.9所示：5′-GGAGTCAGAGATGGATGAAAATGAT-3′，

其下游引物序列如SEQ ID No.10所示：5′-TATTGAATGGTAGCACCAGAATGGT-3′。

2.一种检测侵染番茄病毒的方法，其特征在于，利用权利要求1所述引物组进行多重RT-PCR检测。

3.根据权利要求2所述的检测侵染番茄病毒的方法，其特征在于，所述RT的反应体系及条件为：随机引物[oligo(dT) Primer] 5μL，植物总RNA 4μL， 10 mmol /L dNTP Mixture2 μL，65℃变性 5 min，迅速冰浴 5 min; 再加入5 × PrimeScript^TMBuffer 8μL，40U/μLRNase Inhibitor 1 μL，PrimeScript^TM RTase 1 μL， RNase Free H₂O 4 μL，42℃60 min，95℃ 5 min至结束。

4.根据权利要求2所述的检测侵染番茄病毒的方法，其特征在于，PCR的反应体系为30μL：Premix Taq 15μL，TZSV上下引物各0.8μL，ToCV上下引物各0.8μL，TMV上下引物各0.4μL，ChiVMV上下引物各 0.4μL，PeVYV上下引物各1 μL；cDNA 5μL，ddH₂O 补至总体系30μL。

5.根据权利要求2所述的检测侵染番茄病毒的方法，其特征在于，所述PCR的反应程序为: 94℃ 5min; 94℃ 30s，56℃ 2 min，42个循环; 72℃ 10min。

6.一种含有权利要求1所述引物组的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒可用于检测引物组所相应的番茄病毒。