[发明专利]稳定表达仓鼠TIGAR基因的BHK细胞系及其构建方法和应用有效
| 申请号： | 201910344592.1 | 申请日： | 2019-04-26 |
| 公开（公告）号： | CN110093318B | 公开（公告）日： | 2021-08-03 |
| 发明（设计）人： | 孟春春;丁铲;栗永华;仇旭升;孙英杰;谭磊;宋翠萍;廖瑛;刘炜炜 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院上海兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心上海分中心） |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;C12N7/00;C12R1/91 |
| 代理公司： | 上海段和段律师事务所 31334 | 代理人： | 李慧;郭国中 |
| 地址： | 201100 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 稳定 表达 仓鼠 tigar 基因 bhk 细胞系 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种稳定表达仓鼠TIGAR基因的BHK细胞系，其含有TIGAR基因，分类命名为：仓鼠肾细胞BHK-HTIGAR，保藏号为 CCTCC NO:C201928。
2.一种根据权利要求1所述稳定表达仓鼠TIGAR基因的BHK细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、扩增仓鼠TIGAR基因并构建质粒；
B、将步骤A构建的质粒与PAX、PMD2G质粒同时转入293T细胞，形成包装好的慢病毒；
C、用包装好的慢病毒感染BHK细胞后，进行药物筛选，然后扩大培养，即得所述细胞系；
其中所述仓鼠TIGAR基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
3.根据权利要求2所述的稳定表达仓鼠TIGAR基因的BHK细胞系的构建方法，其特征在于，步骤A中，扩增所述仓鼠TIGAR基因的引物序列如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示。
4.根据权利要求2所述的稳定表达仓鼠TIGAR基因的BHK细胞系的构建方法，其特征在于，步骤A中，所述构建质粒的步骤如下：
将扩增后的仓鼠TIGAR基因与载体片段连接，所得连接产物加入到DH5α感受态细胞中，热激后加入培养基中进行培养，挑选菌落并提取质粒。
5.根据权利要求2所述的稳定表达仓鼠TIGAR基因的BHK细胞系的构建方法，其特征在于，步骤C中，所述药物为抗生素。
6.一种根据权利要求1所述的稳定表达仓鼠TIGAR基因的BHK细胞系在新城疫病毒增殖中的应用。
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