[发明专利]一种板栗与真菌离体共生培养的方法

权利要求书

1.一种板栗与真菌离体共生培养的方法，其特征在于，包括如下步骤：

将板栗根系与真菌的纯菌丝共培养，共培养时将板栗根系和纯菌丝使用第一半透膜与共培养的培养基隔离，所述第一半透膜的孔径大小为0.5μm-0.7μm；

所述真菌包括硬皮马勃菌、美味牛肝菌、大红菇、须腹菌中的任一种；

所述第一半透膜为玻璃纤维膜；

所述共培养的方法包括：在板栗无菌苗开始萌发二级侧根时与真菌的纯菌丝共培养；

所述共培养的培养基为P20培养基；所述P20培养基的组分包括：Di-NH₄-tartrat，0.5g·L^-1；KH₂PO₄ 1 g·L^-1；MgSO₄•7H₂O 0.5 g·L^-1；葡萄糖1 g·L^-1；1000×微量元素母液1mL·L^-1；1000×盐酸硫铵母液1mL·L^-1；MES 1 g·L^-1；琼脂为15 g·L^-1；

所述板栗根系的获取方法包括：采用板栗培养基对板栗种子进行培养，培养时采用第三半透膜或滤纸隔离板栗培养基和板栗种子；所述第三半透膜的孔径大小为0.5μm-0.7μm；

对板栗种子培养2d后，切除下胚轴的根尖部位；

待板栗一级侧根生长2-3cm时，转移至真菌培养基中进行培养，直至其萌发二级侧根；

所述共培养的条件包括：采用避光材料包覆板栗根系和纯菌丝，每天光照15-17h，共培养1-4周；共培养过程中，光照时的温度为25-27℃；非光照时，温度为20-22℃。

2.根据权利要求1所述的板栗与真菌离体共生培养的方法，其特征在于，所述第一半透膜的孔径为0.55μm-0.65μm。

3.根据权利要求1或2所述的板栗与真菌离体共生培养的方法，其特征在于，所述纯菌丝的菌落大小为2-2.5cm。

4.根据权利要求1或2所述的板栗与真菌离体共生培养的方法，其特征在于，所述纯菌丝的获取方法包括：采用真菌培养基对真菌进行培养得到纯菌丝，培养时采用第二半透膜隔离真菌培养基和真菌；所述第二半透膜的孔径大小为0.5μm-0.7μm。

5.根据权利要求4所述的板栗与真菌离体共生培养的方法，其特征在于，所述真菌的培养条件包括：在25±1℃条件下，暗培养10-15d。

6.根据权利要求4所述的板栗与真菌离体共生培养的方法，其特征在于，所述第二半透膜为玻璃纤维膜。

7.根据权利要求1所述的板栗与真菌离体共生培养的方法，其特征在于，所述板栗种子的培养条件包括：将板栗种子接种至板栗培养基中，使用避光材料包裹根系所在的培养皿，每天光照15-17h培养。

8.根据权利要求1所述的板栗与真菌离体共生培养的方法，其特征在于，所述板栗培养基为WPM培养基。

9.根据权利要求1所述的板栗与真菌离体共生培养的方法，其特征在于，所述第三半透膜为玻璃纤维膜。