[发明专利]一种氯霉素直接竞争化学发光高特异性免疫分析方法

权利要求书

1.一种直接竞争化学发光免疫检测氯霉素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)制备抗体标记物

辣根过氧化物酶HRP经高碘酸钠活化与抗氯霉素抗体进行偶联反应进一步加入NaBH₄饱和甲醇溶液，充分进行还原反应后得到辣根过氧化物酶-氯霉素抗体标记物；

(2)直接竞争化学发光免疫检测

将预处理后的样品放置于氯霉素包被完成的酶标板各孔中，加入步骤(1)制备的抗体标记物，进行直接竞争反应；洗板后各孔加入化学发光底物，测定发光强度。

2.根据权利要求1所述的检测氯霉素的方法，其特征在于，步骤(1)使用高碘酸钠NaIO₄对辣根过氧化物酶HRP进行活化。

3.根据权利要求1所述的检测氯霉素的方法，其特征在于，步骤(1)活化后的辣根过氧化物酶HRP与氯霉素抗体IgG进行偶联。

4.根据权利要求1所述的检测氯霉素的方法，其特征在于，步骤(1)使用NaBH₄饱和甲醇溶液对偶联后的酶标氯霉素抗体进行还原反应。

5.根据权利要求1所述的检测氯霉素的方法，其特征在于，步骤(2)加样前预处理包括包被、洗涤、密封等步骤；加样后处理包括洗涤步骤，无需间接竞争反应步骤，即可进行发光强度测定。

6.根据权利要求1所述的检测氯霉素的方法，其特征在于，步骤(2)所述化学发光底物为高灵敏鲁米诺化学发光底物。

7.一种基于权利要求1所述方法的氯霉素定量分析方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：

a、建立工作曲线方程

制备梯度浓度的氯霉素标准工作溶液，将上述工作溶液加入若干份样品中制备加标样品，处理后得到供试溶液；依照权利要求1步骤(2)的方法，测定加标样品的发光强度值，用所获得的每个浓度的标准品溶液的发光强度平均值(B)除以稀释溶液(0标准)的发光强度值(B0)再乘以100％，即百分发光值，

百分发光值(％)＝(B/B0)×100％

以标准品溶液的浓度(ng/mL)的半对数值为X轴，百分发光值为Y轴，绘制标准曲线；

b、待测样品的氯霉素定量检测

称取若干份待测样品，经处理后得到待测溶液，采用权利要求1步骤(2)的方法测定发光强度值，将数值代入步骤a建立的工作曲线方程计算出待测样品中氯霉素的含量。

8.一种基于权利要求1所述方法的氯霉素定量分析方法，其特征在于所述方法包括以下样品前处理步骤：

准确称取1.0g(或1.0mL)保健食品样品，分别置于50mL聚四氟乙烯管中。然后将向每份样品中加入10mL PBS溶液，震荡、涡旋提取10min，4℃、9000g离心5min，弃去上层脂肪层，取中间层溶液过0.45μm水相滤膜，得到待测溶液。