[发明专利]用于敲除RBP4基因的sgRNA、RBP4基因缺失细胞株的构建方法及应用

权利要求书

1.一种用于敲除RBP4基因的sgRNA序列，其特征在于，所述sgRNA的靶DNA序列如SEQ IDNO:3所示。

2.一种敲除人肝癌细胞RBP4基因的非疾病诊断治疗方法，其特征在于，为利用CRISPR/Cas系统在体外对人肝癌细胞中的RBP4基因进行改造，具体包括如下步骤：

1)人工合成如权利要求1所述的靶DNA序列及其互补链；

2)将所合成的核酸片段插入到sgRNA骨架表达质粒载体的多克隆位点并转化，挑单克隆菌株，提取sgRNA重组质粒，测序鉴定获得测序正确的sgRNA重组质粒；其中，sgRNA骨架表达质粒载体还表达Cas9核酸酶；

3)采用慢病毒转染法将sgRNA重组质粒转染人肝癌细胞，即得敲除RBP4基因的人肝癌细胞。

3.一种RBP4基因缺失细胞株的构建方法，其特征在于，对如权利要求2所得的敲除RBP4基因的人肝癌细胞进行传代筛选，获得稳定敲除RBP4的人肝癌细胞。

4.一种RBP4基因缺失细胞株，其特征在于，为采用如权利要求3所述的RBP4基因缺失细胞株的构建方法制备所得。

5.一种如权利要求1所述的用于敲除RBP4基因的sgRNA序列在制备用于在体外对人肝癌细胞基因组中进行RBP4基因定点敲除试剂盒中的应用。

6.一种用于在体外对人肝癌细胞基因组中进行RBP4基因定点敲除试剂盒，其特征在于，包括如下1)-2)中的任一种：

1)如权利要求1所述的用于敲除RBP4基因的sgRNA序列；

2)如权利要求2所述的sgRNA重组质粒。