[发明专利]一种己酸菌增殖培养基、己酸发酵和己酸菌筛选方法

权利要求书

1.一种己酸菌增殖培养基，其特征在于，所述己酸菌增殖培养基由蛋白胨10.0g/L、牛肉粉10.0g/L、酵母粉3.0g/L、葡萄糖1.0～5.0g/L、可溶性淀粉1.0g/L、氯化钠5.0g/L、醋酸钠3.0～6.0g/L、L-半胱氨酸盐酸盐0.5g/L、抗坏血酸0.3～1.0g/L、琼脂或卡拉胶0.5～2.0g/L和蒸馏水1000mL组成。

2.如权利要求1所述的己酸菌增殖培养基，其特征在于，所述己酸菌增殖培养基pH值6.8±0.1。

3.一种使用权利要求1所述己酸菌增殖培养基的己酸菌的发酵方法，其特征在于，所述己酸菌的发酵方法包括：

第一步，将液体培养基分装至100mL容积的厌氧瓶；选择性地添加维生素B10.5g/L，维生素K10.0005g/L或氯化血红素0.005～0.01g/L；

第二步，高压灭菌121℃，20min，冷却到50～70℃，添加预先灭菌好的液封油以隔绝空气；

第三步，接种0.5～5.0％己酸菌液或者使用接种环挑入单菌落；在瓶盖和封口膜之间，插入灭菌好的针头；

第四步，置于30～37℃恒温培养，静置培养6～10天，观察培养液的浑浊程度及产气情况；

第五步，补添0.2～1.0g/L生物素，0.01％～0.09％m/Vol的偏重亚硫酸钾或钠，1.0％～3.0％v/v乙醇，以及柠檬酸铁铵或硫酸亚铁0.5～1.0g/L；制备成FRCM液体发酵培养基(进入己酸发酵)；

第六步，观察厌氧瓶中发酵液是否出现变黑，记录变黑的时间和变黑程度(初筛)；至培养时间为14～20天，发酵液的变化趋于平稳后，结束发酵。

4.如权利要求3所述的己酸菌的发酵方法，其特征在于，所述己酸菌的发酵方法液封油的组分是：液体石蜡和凡士林的混合物；液体石蜡和凡士林比例3:1～6:1。

5.一种由权利要求3～4任意一项所述己酸菌的发酵方法得到的己酸菌发酵液。

6.一种如权利要求5所述己酸菌发酵液中的己酸菌检测方法，其特征在于，所述己酸菌检测方法包括：

第一步，取1.5mL发酵液，离心；取3～5滴上清液，滴加若干滴1mL的1.6～2.0％的酸度指示剂刃天青或者溴甲酚紫，检查变色情况(初筛)；

第二步，取1mL上清液，加入0.4～0.6比例的无水乙醇，混匀；加入二乙基丁酸，使用极性柱的气相色谱-质谱联用法测定己酸的含量(复筛)。

7.如权利要求6所述的己酸菌检测方法，其特征在于，所述第二步使用极性柱的气相色谱-质谱联用法测定己酸的含量：安捷伦气相色谱TG-WAXMS A柱长60m，内径0.25mm，膜厚0.25μm；分流比20:1，载气高纯氦气，流速1ml/min；程序升温条件：开始温度为40℃，以40℃/min升高至245℃，保持4.8min。