[发明专利]一种无毒性破伤风梭菌基因工程亚单位疫苗及其生产方法

权利要求书

1.一种无毒性破伤风梭菌基因工程亚单位疫苗，其特征在于所述疫苗含有采用大肠杆菌作为宿主细胞表达的重组破伤风梭菌毒素(rTTc)；该重组毒素是由重组表达rTTc的大肠杆菌(Escherichia coli)的BL21(DE3)细胞作为生产菌株制备的，该菌株被命名为大肠埃希氏菌BL/TT株，并已于2019年03月08日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.17320；

所述疫苗用于预防由破伤风梭菌感染引起的疾病。

2.权利要求1所述一种无毒性破伤风梭菌基因工程亚单位疫苗，其特征在于所述表达的rTTc，与野生型破伤风成熟毒素相比，只含有无毒的C片段；

所述rTTc无毒力，大大降低了疫苗生产过程中的生物安全风险。

3.权利要求1所述一种无毒性破伤风梭菌基因工程亚单位疫苗，其特征在于所述表达的rTTc，其编码的基因序列经过密码子优化，更易于在大肠杆菌中实现高表达和可溶表达。

4.权利要求1所述一种无毒性破伤风梭菌基因工程亚单位疫苗，其特征在于所述表达的rTTc，含有便于蛋白纯化的标签，优选为C端含有6组氨酸(6*His)标签。

5.权利要求1所述一种无毒性破伤风梭菌基因工程亚单位疫苗，其特征在于其制备方法为：通过宿主细胞表达rTTc，用所述表达rTTc的埃希氏大肠菌BL/TT株作为疫苗生产菌株，经发酵培养、诱导表达、菌体破碎、可溶性抗原蛋白分离纯化后，加佐剂混合制成。

6.权利要求1所述一种无毒性破伤风梭菌基因工程亚单位疫苗，其特征在于用于表达rTTc的“宿主细胞”，所述“宿主细胞”涵盖原核细胞和或真核细胞，可以是产抱子梭菌、产气荚膜梭菌、丙酮丁醇梭菌、蜡样芽胞杆菌、苏云金芽抱杆菌、曹状芽抱杆菌、嗜热溶蛋白芽胞杆菌、炭疽芽抱杆菌、巨大芽抱杆菌、枯草芽抱杆菌、大肠杆菌或酵母细胞；

所述宿主细胞优选地是大肠杆菌宿主细胞，特别是大肠杆菌BL21(DE3)或Rosetta(DE3)。