[发明专利]一种β链变异的血红蛋白糖化率的测定方法

说明书

本发明公开一种β链变异的血红蛋白糖化率的测定方法，涉及医用临床检测技术领域。该方法通过MALDI‑TOF‑MS对含有正常血红蛋白的全血样本进行质谱检测，得到比例常数平均值C；然后对标准品进行质谱检测，得到标准曲线Y＝[a*A(βGHb)/(A(βHb)+(βGHb))+b]×100％；当βGHb蛋白峰受到β链变异体的影响时，则利用血红蛋白糖化率的计算公式Y＝[a*C*A(αGHb)/(A(αHb)+A(αGHb))+b]×100％，可得出血红蛋白糖化率。本发明的测定方法可对β链变异的血红蛋白糖化率的测定，且灵敏度和准确性高，重复性好。

技术领域

本发明涉及医用临床检测技术领域。更具体地，涉及一种β链变异的血红蛋白糖化率的测定方法。

背景技术

糖化血红蛋白(HbA1c)是血液中的葡萄糖与血红蛋白β链N末端缬氨酸残基以共价键结合的稳定化合物。血糖通过弥散方式进入细胞内，无需胰岛素参与。血糖与血红蛋白结合过程缓慢且不可逆，在红细胞死亡之前一直存在。每个红细胞内都有血红蛋白，而红细胞的寿命为120天，所以糖化血红蛋白比例能反应测定前1-2个月的平均血糖水平。在国内各大医院，已经将HbA1c作为监测糖尿病的一个金指标，早在2010年，美国糖尿病协会就将HbA1c作为糖尿病的诊断标准。

当血红蛋白β链存在变异时，对于HbA1c的测定有一定的影响。目前，对于HbA1c的测定，按照其测定理论分为两大类，第一类方法是基于糖化血红蛋白所带电荷与非糖化血红蛋白所带电荷不同而测定，包括电泳法和离子交换高效液相色谱法。对于毛细管电泳法来说，从理论上是可以检测到常见的变异体，正常和异常的血红蛋白HbA₂、HbE、HbS、HbD、HbF、HbA₀、HbG、HbA₁c、HbH等从阴极到阳极依次被检测到，常见的血红蛋白变异体与HbA₁c完全分离，HbA₁c检测不受影响，并且可以提示变异体的存在，但整个实验耗费时间长，外界对其干扰因素多，对操作人员技术要求高。离子交换高效液相色谱法能否提示变异体的存在受仪器分辨率的影响，高分辨的设备能够清晰显示出峰时间以及面积，可能提示变异体的存在。第二类方法是糖化血红蛋白的结构与非糖化血红蛋白的结构不同而测定，包括酶法、亲和层析法和免疫法。这三种方法同样不能提示血红蛋白变异体的存在。

因此，需要提供一种新的方法，当血红蛋白的β链存在变异时，仍然可以定量血红蛋白的糖化率。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种β链变异的血红蛋白糖化率的测定方法，该方法可准确对β链变异的血红蛋白糖化率进行定量测定。

为达到上述目的，本发明采用下述技术方案：

一种β链变异的血红蛋白糖化率的测定方法，包括以下步骤：

利用飞行时间质谱仪对若干含有正常血红蛋白的全血样本进行质谱检测，得到样品的αHb的质谱峰面积A(αHb)、αGHb的质谱峰面积A(αGHb)、βHb的质谱峰面积A(βHb)、βGHb的质谱峰面积A(βGHb)，计算每个样本的比例常数R2/R1的数值，其中R1＝A(αGHb)/(A(αHb)+A(αGHb))，R2＝A(βGHb)/(A(βHb)+A(βGHb))，求得所有样本的比例常数平均值C；

利用飞行时间质谱仪对若干人血红蛋白溶液中糖化血红蛋白标准物质进行质谱检测，得到标准曲线Y＝[a*A(βGHb)/(A(βHb)+A(βGHb))+b]×100％，其中，Y为血红蛋白的糖化率；

利用飞行时间质谱仪对含有β链变异的待测血液样品进行质谱检测，得到样品的质谱图、αHb的质谱峰面积A(αHb)以及αGHb的质谱峰面积A(αGHb)；

对质谱图进行分析判断，若βGHb蛋白峰受到β链变异体的影响，则利用血红蛋白糖化率的计算公式Y＝[a*C*A(αGHb)/(A(αHb)+A(αGHb))+b]×100％，得出β链变异的血红蛋白糖化率Y。