[发明专利]一种生产β-丙氨酸的重组大肠杆菌及其厌氧发酵的方法

权利要求书

1.一种采用厌氧发酵法生产β-丙氨酸的方法，其特征在于，将产β-丙氨酸的重组菌进行厌氧发酵生产；

所述产β-丙氨酸的重组菌同时整合表达和游离表达了天冬氨酸-α-脱羧酶基因panD，并敲除染色体中乙醛酸循环抑制子iclR基因；所述整合表达是将前端融合了温度开关的天冬氨酸-α-脱羧酶基因panD整合到大肠杆菌出发菌株的染色体上；所述游离表达是将天冬氨酸-α-脱羧酶基因panD连接到质粒pPL451上获得重组质粒pPL-panD，然后将重组质粒pPL-panD转入大肠杆菌出发菌中；

所述大肠杆菌出发菌株是敲除野生型菌株E. coli CICIM B0016中的乙酸、甲酸、乙醇、琥珀酸和乳酸代谢产物合成途径编码基因ackA-pta、pflB、adhE、frdA和ldhA得到重组菌株E. coliB0016-050，然后在E. coli B0016-050中敲除天冬氨酸激酶、泛酸合成酶和葡萄糖转运蛋白EⅡCBGlc的编码基因lysC、panC和ptsG而获得的菌株；

所述天冬氨酸-α-脱羧酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述前端融合了温度开关的天冬氨酸-α-脱羧酶基因panD的融合基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

所述重组菌利用强诱导型启动子Ptac替换染色体上天冬氨酸氨裂解酶aspA基因原有的弱启动子；所述强诱导型启动子Ptac的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述厌氧发酵为将所述重组菌接种于含有甘油的培养基中，进行厌氧发酵。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述厌氧发酵具体是，将所述重组菌接种至发酵培养基中，震荡好氧培养至OD₆₀₀=2.5，然后补料甘油并调节pH=7，同时调节温度至42℃诱导，密闭后继续静置厌氧培养。