[发明专利]Peptibody多表位疫苗发酵生产工艺与应用

权利要求书

1.一种Peptibody多表位疫苗发酵生产工艺，其特征在于，包括如下步骤：

（1）接种：将Peptibody工程菌接种至M₉基础培养基，在有氧条件下增殖；

（2）补料：待菌体进入对数生长期后，加入M₉补料培养基；

（3）诱导：在溶氧量低于步骤（1）的条件下，

当菌体进入对数生长平台期时加入乳糖进行诱导；

（4）下罐：

诱导2～12 h后下罐；

所述的Peptibody多表位疫苗的氨基酸序列如SEQID NO.1所示；

步骤（1）中所述的M₉基础培养基的配方为：15.12 g/L Na₂HPO₄•12H₂O，3 g/L KH₂PO₄，0.5 g/L NaCl，1 g/L NH₄Cl，20 g/L 蛋白胨，0.2 g/L MgCl₂，0.01%v/v甘油和10 g/L酵母提取物；

步骤（2）中所述的M₉补料培养基的配方为：80 g/L蛋白胨，40g/L酵母提取物，0.2%v/v甘油和5 g/L MgCl₂；

步骤（2）中所述的M₉补料培养基的添加量按M₉基础培养基体积的1/3～3/10进行添加；

步骤（3）中所述的乳糖的终浓度为5～30 g/L；

步骤（3）中所述的加入乳糖进行诱导在接种后第7～9 h加入乳糖；

步骤（3）中所述的加入乳糖进行诱导时菌液OD_600nm为1.0～1.2；

所述的生产工艺在下罐后还包括收集和/或洗涤菌体的步骤；

步骤（1）中所述的Peptibody工程菌为Peptibody工程菌的种子液；

步骤（2）中所述的补料在接种后第2～5 h内一次性流加；

步骤（3）中所述的乳糖的终浓度为15～25 g/L；

步骤（3）中所述的溶氧量为大于30%；

步骤（3）中所述的诱导的温度为20～40℃。

2.根据权利要求1所述的Peptibody多表位疫苗发酵生产工艺，其特征在于：

步骤（1）中所述的Peptibody工程菌的种子液的接种量为2%v/v～8%v/v；

所述的收集通过离心进行收集；

所述的洗涤菌体采用磷酸缓冲液进行洗涤；

洗涤的次数为至少3次；

所述的种子液在LB培养基中培养得到；

步骤（2）中所述的补料为在接种后第2 h一次性流加；

步骤（3）中所述的乳糖的终浓度为20 g/L；

步骤（3）中所述的溶氧量为30%～80%；

步骤（3）中所述的诱导的温度为28～30℃。

3.根据权利要求2所述的Peptibody多表位疫苗发酵生产工艺，其特征在于：

所述的离心的条件为4500～8000 rpm、10～30 min；

步骤（3）中所述的诱导的温度为28℃；

所述的种子液通过如下步骤得到：

①将所述的Peptibody工程菌接种到含有卡那霉素的LB培养基中过夜培养，得到一级种子；

②将所述的一级种子接种至LB培养基中培养得到二级种子。

4.根据权利要求2所述的Peptibody多表位疫苗发酵生产工艺，其特征在于：

步骤（1）中所述的Peptibody工程菌的种子液的接种量为8%v/v；

步骤（1）中所述的增殖的条件为37℃、pH=7±0.1。